Stent colique et dissémination des cellules tumorales

1. Recrutement des patients :

   Les patients seront recrutés dans la division de chirurgie colorectale du département de chirurgie de l'Université de Hong Kong, sur une période de 12 à 18 mois. Notre institution est un centre de référence tertiaire pour les patients atteints de cancer colorectal à Hong Kong. Le consentement éclairé des patients sera obtenu une fois les critères d'inclusion remplis.

   L'étude prévoit de recruter 25 patients dans le groupe d'endoprothèse colique pour comparer avec 15 patients dans le groupe témoin.

   Critère d'intégration:

   Groupe de stent colique

   1. Patients atteints d'un cancer colorectal obstructif nécessitant un stent colique comme traitement
   2. Âge> 18 ans et est capable de donner un consentement éclairé
   3. Consentement éclairé pour la collecte de sang obtenu

   Groupe de contrôle

   1. Patients atteints d'un cancer colorectal qui subissent une coloscopie sans pose de stent
   2. Âge> 18 ans et est capable de donner un consentement éclairé
   3. Consentement éclairé pour la collecte de sang obtenu
2. Prélèvement sanguin et examen des cellules tumorales circulantes

Environ 10 ml de sang EDTA seront prélevés pour examen avant la procédure (stenting coloscopique ou coloscopie dans le groupe témoin) et le prélèvement sanguin quotidien sera répété pendant 3 jours après la procédure. Le sang sera envoyé au laboratoire pour traitement dans les 2 heures suivant le prélèvement. Les cellules tumorales circulantes, caractérisées par CD45- (pour exclure les cellules hématopoïétiques), CD326+ (pour marquer les cellules épithéliales), CK18+ et CK19+ (pour marquer les cellules intestinales), c'est-à-dire les cellules exprimant CD45-CD326+CK18/19+, seront détectées par tri cellulaire activé par fluorescence (FACS).

Pour chaque ml de sang, 1 ml de solution FCM Lysing sera ajouté et laissé incuber pendant 5 minutes pour lyser les globules rouges, suivi d'une centrifugation à 1000 RPM pendant 5 minutes. Le surnageant sera ensuite aspiré et le culot remis en suspension dans environ 1 ml de PBS 1X froid. 10 µl de l'anticorps approprié seront ajoutés dans les tubes, vortexés et incubés pendant 15 heures dans l'obscurité et à température ambiante. Après incubation, les cellules seront lavées avec du PBS puis incubées avec le deuxième anticorps. Le processus est répété jusqu'à ce que les 4 anticorps aient été marqués sur les cellules. Les cellules seront ensuite analysées sur une machine FACS (MoFlo, Beckman Coulter).