咖啡和可可生物活性化合物的生物利用度和有益特性 (P4L)

将进行人体生物利用度研究以实现上述目标。 人为干预研究将包括一项短期随机交叉试验，旨在测量四种主要咖啡/可可植物化学物质（甲基黄嘌呤、葫芦巴碱）的每种咖啡/可可衍生循环代谢物 (CCDCM) 的每日平均浓度、酚类、二萜类）。 基于不同的消费模式，这项自由生活研究（尽管在采样时间前两天会提供一些最低限度的饮食限制）还将考虑重复剂量对咖啡/可可生物活性物质生物利用度的影响。

该研究将遵循重复剂量、三臂、交叉设计。 该设计是根据 ILSI 的膳食产品干预试验指南选择的。

受试者被分配在 1 个月内以随机顺序服用以下治疗：

1. 上午 9 点每天 1 杯意式浓缩咖啡（“低消费量”）
2. 每天上午 9 点、中午 12 点和下午 3 点喝 3 杯意式浓缩咖啡（“高消费量”）
3. 上午 9 点早餐时 1 杯浓缩咖啡和 2 种含咖啡的可可制品，每天两次（中午 12 点和下午 3 点）。 考虑到含咖啡的可可制品的咖啡因含量，该群体将被命名为“中等消费者”。

将在每个采样日的前两天和采样日提供最低限度的建议，以避免除了通过指定处理引入的咖啡/可可植物化学物质的其他来源，以及标准化咖啡消费时间。 晚餐时间和组成也将在采样日的前一天标准化。 晚上只能喝水。 在取样日（即每个干预期的最后一天），受试者将在早上转诊到门诊，在那里将收集空腹基线血液和尿液样本。 然后，低度和高度消费者将分别喝一杯或三杯意式浓缩咖啡（第一杯咖啡不加糖、甜味剂和牛奶；最后两杯咖啡加 5 克糖），而中度消费者则喝一杯浓缩咖啡和 2 种含咖啡的可可制品，一天两次，按照上述时间服用。 在摄入第一杯咖啡和不含植物化学物质的早餐（糕点）后，将在接下来的 24 小时内的选定时间点收集血液和尿液样本。 饮用第一杯咖啡五小时后，参与者将获得不含咖啡/可可植物化学相关化合物的标准化混合餐（火腿和奶酪三明治）。 水将随意提供。 接受治疗后二十四小时，还将采集血液和尿液样本，以评估是否恢复到基线水平。 此外，还将测量人体测量特征和血压 (BP)。

社会人口变量将通过在招聘时填写的通用问卷进行评估。 调查问卷还将包含有助于确定可能的排除标准的问题（例如 疾病诊断、定期服用药物、食物过敏）。 志愿者的饮食习惯也将在登记期间通过半定量食物频率问卷 (FFQ) 评估膳食总抗氧化能力进行评估。 此外，参与者的食物摄入量和对研究要求的遵守情况将通过 3 天的饮食记录进行评估，在每个干预期间的两个时间点进行管理：i) 在两个工作日和周末的每个干预期间的中间天，和 ii) 在每个干预期结束时，采样日和采样日之​​前 2 天。 每个参与者的习惯性身体活动水平将通过经过验证的国际身体活动问卷进行测量。

血样采集将在内科和外科部门的门诊部进行。 血液采集将由医生进行。 静脉导管将插入肘前静脉，每个受试者的血液样本将在 24 小时内收集在特定的试管中。 在第一次喝咖啡后 24 小时的时间点采血，将通过静脉穿刺进行。 将使用尿液收集器在不同时间段收集尿液样本。

血液样本将被离心，血浆、血清和外周血单核细胞 (PBMC) 将被收集、等分并储存在 -80 °C 下以供进一步处理。 尿样将被等分并储存在-80°C下以供进一步处理。

该研究的主要选定终点是咖啡来源的血浆循环酚类代谢物的每日平均浓度的量化，而其他咖啡来源的循环生物活性物质的生物利用度研究、可可来源的循环植物化学物质的生物利用度以及评估心脏代谢标志物将被视为次要终点。