Biodisponibilidad y Propiedades Beneficiosas de los Compuestos Bioactivos de Café y Cacao (P4L)

Se llevará a cabo un estudio de biodisponibilidad humana para lograr los objetivos descritos anteriormente. El estudio de intervención humana consistirá en un ensayo cruzado aleatorizado a corto plazo, dirigido a medir las concentraciones medias diarias de cada metabolito circulante derivado del café/cacao (CCDCM) para los cuatro grupos principales de fitoquímicos del café/cacao (metilxantinas, trigonelina , fenólicos, diterpenos). Sobre la base de diferentes patrones de consumo, este estudio de vida libre (aunque se proporcionarán algunas restricciones dietéticas mínimas dos días antes de las horas de muestreo) también tendrá en cuenta los efectos de las dosis repetidas sobre la biodisponibilidad de los bioactivos del café/cacao.

El estudio seguirá un diseño cruzado de tres brazos y dosis repetidas. Este diseño ha sido elegido de acuerdo con las directrices del ILSI para ensayos de intervención con productos dietéticos.

Los sujetos fueron asignados a consumir los siguientes tratamientos en orden aleatorio durante 1 mes:

1. 1 taza de café espresso/día ("bajos consumidores") a las 9.00 A.M.
2. 3 tazas de café espresso/día ("altos consumidores") a las 9.00 h, 12.00 h y 15.00 h
3. 1 taza de café espresso en el desayuno 9.00 A.M. y 2 productos a base de cacao que contienen café dos veces al día (a las 12.00 horas y a las 15.00 horas). El grupo se denominará "consumidores medios", considerando el contenido de cafeína de los productos a base de cacao que contienen café.

Se proporcionarán recomendaciones mínimas para evitar otras fuentes de fitoquímicos de café/cacao además de las introducidas a través del tratamiento asignado, y para estandarizar el tiempo de consumo de café, para los dos días previos a cada día de muestreo y en el día de muestreo. El horario y la composición de la cena también se estandarizarán el día anterior al día del muestreo. Sólo se podía beber agua durante la noche. En el día de la toma de muestras (es decir, el último día de cada período de intervención), los sujetos se derivarán por la mañana al ambulatorio donde se recogerán las muestras de sangre y orina de referencia en ayunas. Luego, los consumidores bajos y altos tomarán una o tres tazas de café espresso, respectivamente (sin azúcar, edulcorantes y leche el primer café; con 5 g de azúcar los dos últimos cafés), mientras que los consumidores medios tomarán una taza de café espresso y 2 productos a base de cacao que contengan café dos veces al día, siguiendo el horario descrito anteriormente. Después de la ingestión del primer café junto con un desayuno libre de fitoquímicos (un pastel), se recolectarán muestras de sangre y orina en puntos de tiempo seleccionados a lo largo de las siguientes 24 horas. Cinco horas después del consumo del primer café, los participantes recibirán una comida mixta estandarizada (sándwich de jamón y queso) libre de compuestos fitoquímicos relacionados con el café y el cacao. El agua estará disponible ad libitum. Veinticuatro horas después de recibir el tratamiento, también se tomarán muestras de sangre y orina para evaluar el regreso a la línea de base. Además, se medirán las características antropométricas y la presión arterial (PA).

Las variables sociodemográficas se evaluarán mediante un cuestionario genérico cumplimentado en el momento de la contratación. El cuestionario también contendrá preguntas útiles para identificar posibles criterios de exclusión (p. diagnóstico de enfermedades, consumo regular de medicamentos, alergia alimentaria). Los hábitos dietéticos de los voluntarios también se evaluarán durante la inscripción, a través de un cuestionario semicuantitativo de frecuencia de alimentos (FFQ) para la evaluación de la capacidad antioxidante total de la dieta. Además, la ingesta de alimentos de los participantes y el cumplimiento de los requisitos del estudio se evaluarán mediante registros dietéticos de 3 días, administrados a lo largo de cada período de intervención en dos momentos: i) en la mitad de cada período de intervención durante dos días de la semana y un fin de semana y ii) al final de cada período de intervención, 2 días antes del día de muestreo y el día de muestreo. El nivel de actividad física habitual de cada participante se medirá a través de Cuestionarios Internacionales de Actividad Física validados.

La toma de muestras de sangre se realizará en la unidad ambulatoria del Departamento de Medicina y Cirugía. La extracción de sangre será realizada por un médico. Se insertará un catéter venoso en la vena antecubital y se recolectarán muestras de sangre de cada sujeto en tubos específicos durante 24 horas. El muestreo de sangre en el punto de tiempo 24 h después del primer consumo de café se realizará mediante punción venosa. Las muestras de orina se recogerán durante diferentes periodos de tiempo mediante colectores de orina.

Las muestras de sangre se centrifugarán y el plasma, el suero y las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se recolectarán, dividirán en alícuotas y almacenarán a -80 °C para su posterior procesamiento. Las muestras de orina se dividirán en alícuotas y se almacenarán a -80 °C para su posterior procesamiento.

El criterio principal de valoración seleccionado del estudio es la cuantificación de la concentración media diaria de metabolitos fenólicos circulantes en plasma derivados del café, mientras que el estudio de la biodisponibilidad de otros bioactivos circulantes derivados del café, la biodisponibilidad de los fitoquímicos circulantes derivados del cacao y la evaluación de marcadores cardiometabólicos se considerarán criterios de valoración secundarios.