Biodisponibilità e proprietà benefiche dei composti bioattivi del caffè e del cacao (P4L)

Uno studio di biodisponibilità umana sarà condotto per raggiungere gli obiettivi sopra descritti. Lo studio di intervento sull'uomo consisterà in uno studio incrociato randomizzato a breve termine, volto a misurare le concentrazioni medie giornaliere di ciascun metabolita circolante derivato da caffè/cacao (CCDCM) per i quattro gruppi principali di sostanze fitochimiche di caffè/cacao (metilxantine, trigonellina , fenolici, diterpeni). Sulla base di diversi modelli di consumo, questo studio di vita libera (sebbene alcune restrizioni dietetiche minime saranno fornite due giorni prima dei tempi di campionamento) prenderà in considerazione anche gli effetti di dosi ripetute sulla biodisponibilità dei bioattivi di caffè/cacao.

Lo studio seguirà un disegno cross-over a dose ripetuta, a 3 bracci. Questo design è stato scelto secondo le linee guida dell'ILSI per le prove di intervento con prodotti dietetici.

I soggetti sono stati assegnati a consumare i seguenti trattamenti in ordine casuale per 1 mese:

1. 1 tazzina di caffè espresso/giorno ("bassi consumatori") alle ore 9:00
2. 3 caffè espresso/giorno ("consumatori elevati") alle ore 9.00, 12.00 e 15.00
3. 1 tazzina di caffè espresso a colazione 9.00 A.M. e 2 prodotti a base di cacao contenenti caffè due volte al giorno (alle 12:00 e alle 15:00). Il gruppo sarà denominato "consumatori medi", considerando il contenuto di caffeina dei prodotti a base di cacao contenenti caffè.

Raccomandazioni minime per evitare altre fonti di sostanze fitochimiche di caffè/cacao oltre a quelle introdotte attraverso il trattamento assegnato, e per standardizzare il tempo di consumo del caffè, saranno fornite per i due giorni precedenti a ciascun giorno di campionamento e nel giorno di campionamento. Anche l'orario e la composizione della cena saranno standardizzati il ​​giorno prima del giorno del campionamento. Durante la notte si poteva bere solo acqua. Al giorno del prelievo (ovvero l'ultimo giorno di ogni periodo di intervento), i soggetti si riferiranno al mattino presso l'ambulatorio dove verranno raccolti i campioni di sangue e urina di base a digiuno. Poi, i consumatori bassi e alti berranno rispettivamente una o tre tazzine di caffè espresso (senza zucchero, edulcoranti e latte per il primo caffè; con 5 g di zucchero per gli ultimi due caffè), mentre i consumatori medi berranno una tazzina di caffè espresso e 2 prodotti a base di cacao contenenti caffè due volte nell'arco della giornata, rispettando le tempistiche sopra descritte. Dopo l'ingestione del primo caffè insieme a una colazione priva di fitochimici (un pasticcino), verranno raccolti campioni di sangue e urina in momenti selezionati durante le 24 ore successive. Cinque ore dopo il consumo del primo caffè, i partecipanti riceveranno un pasto misto standardizzato (panino con prosciutto e formaggio) privo di composti fitochimici correlati a caffè/cacao. L'acqua sarà disponibile ad libitum. Ventiquattro ore dopo aver ricevuto il trattamento, verranno prelevati anche campioni di sangue e urine per valutare il ritorno al basale. Inoltre, verranno misurate le caratteristiche antropometriche e la pressione arteriosa (BP).

Le variabili socio-demografiche saranno valutate attraverso un questionario generico compilato al momento dell'assunzione. Il questionario conterrà anche domande utili ad individuare eventuali criteri di esclusione (es. diagnosi di malattie, consumo regolare di farmaci, allergie alimentari). Durante l'arruolamento saranno valutate anche le abitudini alimentari dei volontari, attraverso un questionario semi-quantitativo sulla frequenza alimentare (FFQ) per la valutazione della capacità antiossidante totale della dieta. Inoltre, l'assunzione di cibo dei partecipanti e il rispetto dei requisiti dello studio saranno valutati mediante registri dietetici di 3 giorni, somministrati durante ciascun periodo di intervento in due momenti: i) nel mezzo di ciascun periodo di intervento durante due giorni feriali e un fine settimana giorno, e ii) al termine di ciascun periodo di intervento, 2 giorni prima del giorno di campionamento e del giorno di campionamento. Il livello di attività fisica abituale di ciascun partecipante sarà misurato attraverso un questionario internazionale sull'attività fisica convalidato.

Il prelievo dei campioni di sangue sarà effettuato presso l'ambulatorio del Dipartimento di Medicina e Chirurgia. La raccolta del sangue sarà effettuata da un medico. Un catetere venoso verrà inserito nella vena antecubitale e i campioni di sangue di ciascun soggetto verranno raccolti in apposite provette nell'arco di 24 ore. Il prelievo di sangue al punto temporale 24 ore dopo il primo consumo di caffè sarà effettuato mediante prelievo venoso. I campioni di urina saranno raccolti durante diversi periodi di tempo utilizzando raccoglitori di urina.

I campioni di sangue saranno centrifugati e le cellule mononucleari di plasma, siero e sangue periferico (PBMC) saranno raccolte, aliquotate e conservate a -80 °C per ulteriori elaborazioni. I campioni di urina saranno aliquotati e conservati a -80°C per ulteriori elaborazioni.

L'endpoint primario selezionato dello studio è la quantificazione della concentrazione media giornaliera di metaboliti fenolici circolanti plasmatici derivati ​​dal caffè, mentre lo studio della biodisponibilità di altri bioattivi circolanti derivati ​​dal caffè, la biodisponibilità di sostanze fitochimiche circolanti derivate dal cacao e la valutazione dei marcatori cardiometabolici saranno considerati endpoint secondari.