Kahvin ja kaakaon bioaktiivisten yhdisteiden hyötyosuus ja hyödylliset ominaisuudet (P4L)

Yllä kuvattujen tavoitteiden saavuttamiseksi suoritetaan ihmisen biologinen hyötyosuustutkimus. Ihmisen interventiotutkimus koostuu lyhytaikaisesta satunnaistetusta ristikkäistutkimuksesta, jossa mitataan kunkin kahvin/kaakaosta peräisin olevan verenkierron metaboliitin (CCDCM) päivittäiset keskimääräiset pitoisuudet kahvin/kaakaon fytokemikaalien neljälle pääryhmälle (metyyliksantiinit, trigonelliini). , fenolit, diterpeenit). Erilaisten kulutustottumusten perusteella tässä vapaata elämää koskevassa tutkimuksessa (vaikka joitakin vähimmäisruokavaliorajoituksia annetaan kaksi päivää ennen näytteenottoa) otetaan huomioon myös toistuvien annosten vaikutukset kahvin/kaakaon bioaktiivisten aineiden hyötyosuuteen.

Tutkimuksessa noudatetaan toistuvan annoksen, 3-haaraisen, cross-over -mallia. Tämä malli on valittu ILSI:n ohjeiden mukaan interventiokokeisiin ruokavaliotuotteilla.

Koehenkilöt määrättiin nauttimaan seuraavat hoidot satunnaisessa järjestyksessä 1 kuukauden ajan:

1. 1 kuppi espressokahvia/päivä ("pienet kuluttajat") klo 9.00
2. 3 kupillista espressokahvia/päivä ("korkeakuluttaja") klo 9.00, 12.00 12.00 ja 15.00
3. 1 kuppi espressokahvia aamiaisella klo 9.00 ja 2 kahvia sisältävää kaakaopohjaista tuotetta kaksi kertaa päivässä (klo 12.00 ja 15.00). Ryhmän nimeksi tulee "keskikuluttaja", kun otetaan huomioon kahvia sisältävien kaakaopohjaisten tuotteiden kofeiinipitoisuus.

Jokaista näytteenottopäivää edeltäville kahdelle päivälle ja näytteenottopäivälle annetaan minimisuosituksia muiden kahvin/kaakaon fytokemikaalien lähteiden välttämiseksi määrätyn käsittelyn kautta tuotujen lisäksi ja kahvinkulutusajan standardoimiseksi. Myös illallisen ajoitus ja koostumus standardoidaan näytteenottopäivää edeltävänä päivänä. Yön aikana sai juoda vain vettä. Näytteenottopäivänä (eli kunkin interventiojakson viimeisenä päivänä) koehenkilöt suuntautuvat aamulla ambulatorioon, jossa kerätään paaston perustason veri- ja virtsanäytteet. Sitten pienet ja suuret kuluttajat juovat vastaavasti yhden tai kolme kupillista espressokahvia (ilman sokeria, makeutusaineita ja maitoa ensimmäiseen kahviin; 5 g sokerilla kahteen viimeiseen kahviin), kun taas keskikuluttajat juovat kupin espressokahvia. espressokahvi ja 2 kahvia sisältävää kaakaopohjaista tuotetta kahdesti vuorokauden aikana yllä kuvatulla ajoituksella. Ensimmäisen kahvin nauttimisen ja fytokemikaalittoman aamiaisen (leivonnaisen) jälkeen kerätään veri- ja virtsanäytteet valittuina ajankohtina seuraavan 24 tunnin aikana. Viisi tuntia ensimmäisen kahvin nauttimisen jälkeen osallistujat saavat standardoidun seka-aterian (voileipä kinkulla ja juustolla), joka ei sisällä kahvin/kaakaon fytokemikaaliin liittyviä yhdisteitä. Vettä on saatavilla ad libitum. 24 tunnin kuluttua hoidon saamisesta otetaan myös veri- ja virtsanäytteet, jotta voidaan arvioida palautuminen lähtötasolle. Lisäksi mitataan antropometriset ominaisuudet ja verenpaine (BP).

Sosiodemografisia muuttujia arvioidaan yleisellä kyselylomakkeella, joka täytetään rekrytoinnin yhteydessä. Kyselylomake sisältää myös kysymyksiä, jotka ovat hyödyllisiä mahdollisten poissulkemiskriteerien tunnistamisessa (esim. sairauksien diagnosointi, säännöllinen lääkkeiden käyttö, ruoka-aineallergia). Vapaaehtoisten ruokailutottumuksia arvioidaan myös ilmoittautumisen aikana puolikvantitatiivisella ruokafrekvenssikyselyllä (FFQ) ruokavalion kokonaisantioksidanttikapasiteetin arvioimiseksi. Lisäksi osallistujien ravinnonsaantia ja tutkimusvaatimusten noudattamista arvioidaan kolmen päivän ruokavalion avulla, jotka annetaan jokaisen interventiojakson aikana kahdessa vaiheessa: i) kunkin interventiojakson puolivälissä kahden arkipäivän ja viikonlopun aikana. päivä, ja ii) kunkin interventiojakson lopussa, 2 päivää ennen näytteenottopäivää ja näytteenottopäivää. Kunkin osallistujan tavanomaista fyysistä aktiivisuutta mitataan validoidun kansainvälisen fyysisen aktiivisuuden kyselylomakkeen avulla.

Verinäytteiden otto suoritetaan lääketieteen ja kirurgian osaston ambulatoriossa. Veren ottamisen suorittaa lääkäri. Laskimokatetri asetetaan kyynärpäälaskimoon, ja jokaisesta koehenkilöstä otetaan verinäytteitä erityisiin putkiin 24 tunnin aikana. Verinäytteet 24 tunnin kuluttua ensimmäisestä kahvinkulutuksesta tehdään laskimopunktiolla. Virtsanäytteitä kerätään eri ajanjaksoina virtsankerääjien avulla.

Verinäytteet sentrifugoidaan ja plasma, seerumi ja perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC:t) kerätään, jaetaan eriin ja säilytetään -80 °C:ssa jatkokäsittelyä varten. Virtsanäytteet jaetaan eriin ja säilytetään -80 °C:ssa jatkokäsittelyä varten.

Tutkimuksen ensisijaisena päätepisteenä on kahviperäisten plasmassa kiertävien fenolisten aineenvaihduntatuotteiden päivittäisen keskimääräisen pitoisuuden kvantifiointi, kun taas muiden kahvista peräisin olevien verenkierrossa olevien bioaktiivisten aineiden biologisen hyötyosuuden, kaakaosta peräisin olevien kiertävien fytokemikaalien biologisen hyötyosuuden tutkimus ja arviointi kardiometabolisten markkerien kohdalla katsotaan toissijaisiksi päätepisteiksi.