鉴定用于开发个性化胰腺癌疫苗的免疫原性新表位 (CanVac)

背景胰腺导管腺癌 (PDAC) 是最具侵袭性的肿瘤类型之一，预后极差。 如果不进行积极治疗，转移性 PDAC 患者的平均生存期为 3-5 个月 [1]。 自 1970 年代以来，目前手术和辅助治疗的进展未能提高总体生存率。 因此，与传统的基于化学疗法的方案不交叉耐药的新治疗策略势在必行。 最近，癌症治疗的注意力更多地集中在基于免疫的策略上，因为这些疗法通过一种不同于化学疗法或放射疗法的机制发挥作用，并且代表了一种非交叉耐药的治疗选择 [2]。 基于免疫的疗法旨在刺激针对肿瘤抗原的强大 T 细胞反应。 然而，这些制度的发展存在重大挑战。 这些包括肿瘤的免疫原性差和肿瘤内存在高度免疫抑制的环境 [3, 4]。 各种肿瘤疫苗接种策略的临床潜力已在早期临床试验中得到证实，在 PDAC 患者中产生了一些有希望的免疫学和临床反应 [5-8]。 在开发理想的 PDAC 疫苗时，仍有许多障碍需要克服。 至关重要的是，必须确定能引起强烈和特异性免疫反应的特定肿瘤抗原，因为过去癌症疫苗试验的失败在很大程度上可归因于选择了不合适的肿瘤抗原，这些抗原具有较弱的固有免疫潜力 [9, 10]。 高通量分析技术的当前进展使得能够快速确定癌细胞的基因组状态，因此现在可以获得关于个体突变体的综合数据 [11, 12]。 现在也可以根据其 HLA 结合能力来选择通过外显子组测序鉴定的错义突变，以生成可由所需 HLA 分子呈递的合成肽 [12、13]。 该平台的开发使我们能够分析来自 100 名 PDAC 患者的已发表数据 [14]，并建立包含高亲和力 HLA-A2 和 HLA-DP4（最丰富的 HLA I 类和 II 类分子 [15、16]）的数据集以及 HLA-E*01:01 和 HLA-E*01:03 限制性新表位，用于作为候选肽疫苗进行分析。

假设 序列分析使我们能够开发新表位的肽库，这些新表位在患者群体中以高频率表达，并且与 HLA-A2、HLA-DP4、HLA-E*01 的野生型对应物相比具有高结合亲和力:01 或 HLA-*01:03 分子。 我们假设其中一些将具有足够的免疫原性以在体外刺激 T 细胞干扰素-γ (IFN-γ) 反应，这将转化为体内抗肿瘤反应。 然后可以将免疫原性新表位组合在肽疫苗接种计划中，使用溶瘤病毒等佐剂在 PDAC 患者的肿瘤内进行靶向递送和表达，以刺激强大和长期的抗肿瘤反应。

目的 该项目的最初目的是对从可用突变组数据中选择的候选新表位进行体外验证，以使用健康个体的外周血单核细胞 (PBMC) 确定其免疫原性。

研究计划 来自健康个体的 PBMC 样本将使用 Thermofisher Scientific 的市售试剂进行 HLA 分型。 HLA-A2、HLA-DP4、HLA-E*01:01 和/或 HLA-E*01:03 阳性样品将用在对可用序列数据进行生物信息学分析后选择的肽进行脉冲处理。 在两周时间内两轮刺激后，样品中 T 细胞产生的 IFN-γ 和白细胞介素 2 (IL-2) 将通过 ELISA 进行评估，作为肽免疫原性的衡量标准。 一旦确定了免疫原性肽，将同时分析它们的野生型对应物，以确认对突变表位的特异性。 然后将选择其野生型对应物不引发免疫反应的免疫原性肽以包含在基于溶瘤病毒的疫苗中，以使用转基因 HLA-A2/HLA-DP4 小鼠进行体内分析 [17]。