健康男性个体步行和骑行急性反应中血清自噬生物标志物的评估

研究目的 本研究旨在评估步行和骑行对与自噬相关的血清生理生物标志物（Beclin-1、LC3和ATG3）的急性影响。

以往的研究大多只探讨单一类型运动后生物标志物水平的变化。因此，对于具有不同机械负荷特征的运动方案对循环自噬相关生物标志物的影响，目前了解尚不充分。

本研究旨在比较性探讨两种不同运动方案——步行和骑行——对与自噬相关的血清生物标志物的急性影响。

假设 H0：步行和骑行后，血清Beclin-1、LC3和ATG3水平无变化。

H1：步行和骑行后，血清Beclin-1、LC3和ATG3水平有变化。

纳入标准 年龄18-35岁的健康男性志愿者 每周进行2-3天、每天至少30分钟体力活动的个体 无任何已知健康问题的个体

排除标准 单侧/双侧下肢存在急性或慢性损伤的个体 单侧/双侧下肢存在肌肉骨骼疾病的个体 曾接受涉及髋关节和/或膝关节手术干预的个体 存在心肺疾病以致无法进行运动的个体

研究方法 本研究将在获得伦理批准后开始。将纳入20名年龄在18-35岁之间、身体健康（每周至少运动2-3次，每次至少30分钟）且无已知健康问题的健康男性志愿者。

为避免既往疾病状况的影响，将排除患有急性或慢性下肢损伤、肌肉骨骼疾病或有髋关节和/或膝关节手术史的个体。

参与者将被要求在评估前48小时内尽量减少所有体育活动；但允许进行正常的日常活动，如步行和爬楼梯。同时，建议他们在评估日保持日常习惯并摄入相同类型的食物。

运动前后将记录体重、身体质量指数（BMI）、年龄和心率。运动强度将基于心率（HR）确定，计算公式如下：

下限：HR = (220 - 年龄) × 50% 上限：HR = (220 - 年龄) × 85% [8]

心率测量方法是将食指和中指放在颈动脉上测量15秒，然后将该值乘以四。30分钟的运动方案将包括：

前5分钟：下限心率 接下来20分钟：上限心率 最后5分钟：下限心率 人体测量学测量 体重将使用灵敏度为0.1公斤的电子秤测量，身高将使用电子身高计测量。参与者将赤脚，仅穿短裤，膝盖完全伸直，脚跟并拢，直立站立。

运动方案

数据收集将在两次独立的30分钟运动会话中进行，间隔一周：

会话1：参与者将在跑步机上以目标心率步行30分钟。

会话2：一周后，参与者将在自行车测功计上以类似心率骑行30分钟。

除运动类型外，所有程序在两次会话中均相同。参与者将在一天中的同一时间到实验室，以避免昼夜变化的影响。两次会话之间将提供至少一周的休息期，以尽量减少残留效应。

血液采样程序 将在任意手臂的肘窝处插入永久性静脉导管。为尽量减少先前体力活动的影响，参与者到达后将仰卧休息30分钟。

血液样本将在以下时间点采集：

30分钟休息期后（基线） 30分钟运动后立即 运动后30分钟 运动后60分钟 相同程序将在第二次会话（骑行）中重复。血液样本的采集与分析 外周血样本将采集到含凝胶的生化管中。每次采集约2-2.5毫升血液（约半标准管）。

在室温（20-30分钟）下凝固后，样本将在+4°C下以3500 rpm离心10分钟以获得血清。血清样本将储存在-80°C直至分析。

蛋白质测量 血清蛋白质水平将根据制造商的说明使用ELISA试剂盒进行测量。将使用Multiskan Go分光光度计（Thermo Fisher Scientific，芬兰）。测量结果将使用Thermo Scientific SkanIt软件进行分析，蛋白质浓度将通过与标准曲线比较来确定。

分析蛋白质 Beclin-1 LC3 ATG3