Оценка сывороточных аутофагических биомаркеров в остром ответе на ходьбу и езду на велосипеде у здоровых лиц мужского пола

Цель исследования Цель данного исследования — оценить острые эффекты ходьбы и езды на велосипеде на сывороточные физиологические биомаркеры, связанные с аутофагией (Beclin-1, LC3 и ATG3).

Предыдущие исследования в основном изучали изменения уровней биомаркеров после одного вида физической нагрузки. Следовательно, влияние режимов упражнений с различными характеристиками механической нагрузки на циркулирующие биомаркеры, связанные с аутофагией, недостаточно изучено.

Данное исследование направлено на сравнительное изучение острых эффектов двух различных режимов упражнений — ходьбы и езды на велосипеде — на сывороточные биомаркеры, связанные с аутофагией.

Гипотезы H0: Уровни Beclin-1, LC3 и ATG3 в сыворотке не изменяются после ходьбы и езды на велосипеде.

H1: Уровни Beclin-1, LC3 и ATG3 в сыворотке изменяются после ходьбы и езды на велосипеде.

Критерии включения Здоровые добровольцы мужского пола в возрасте 18–35 лет Лица, занимающиеся физической активностью не менее 30 минут в день, 2–3 дня в неделю Лица без каких-либо известных проблем со здоровьем

Критерии исключения Лица с острыми или хроническими травмами нижних конечностей (односторонними/двусторонними) Лица с заболеваниями опорно-двигательного аппарата нижних конечностей (односторонними/двусторонними) Лица, перенесшие хирургическое вмешательство на тазобедренных и/или коленных суставах Лица с кардиопульмональными состояниями, препятствующими выполнению упражнений

Метод исследования Исследование начнется после получения этического одобрения. Всего будет включено 20 здоровых добровольцев мужского пола в возрасте от 18 до 35 лет, которые физически активны (не менее 30 минут, 2–3 раза в неделю) и не имеют известных проблем со здоровьем.

Чтобы исключить влияние предшествующих заболеваний, будут исключены лица с острыми или хроническими травмами нижних конечностей, заболеваниями опорно-двигательного аппарата или перенесшие операции на тазобедренных и/или коленных суставах.

Участникам будет рекомендовано минимизировать все спортивные активности за 48 часов до сессий оценки; однако обычные повседневные активности, такие как ходьба и подъем по лестнице, будут разрешены. Им также посоветуют сохранять привычный распорядок дня и употреблять те же виды пищи в дни оценки.

Масса тела, индекс массы тела (ИМТ), возраст и частота сердечных сокращений будут регистрироваться до и после сессий упражнений. Интенсивность упражнений будет определяться на основе частоты сердечных сокращений (ЧСС), рассчитанной как:

Нижний предел: ЧСС = (220 - возраст) × 50% Верхний предел: ЧСС = (220 - возраст) × 85% [8]

Частота сердечных сокращений будет измеряться путем размещения указательного и среднего пальцев на сонной артерии на 15 секунд, и значение будет умножено на четыре. 30-минутный протокол упражнений будет состоять из:

Первые 5 минут: нижний предел ЧСС Следующие 20 минут: верхний предел ЧСС Последние 5 минут: нижний предел ЧСС Антропометрические измерения Масса тела будет измеряться с помощью цифровых весов с чувствительностью 0,1 кг, а рост — с помощью цифрового ростометра. Участники будут босиком, в одних шортах, с полностью выпрямленными коленями, сведенными пятками и стоять прямо.

Протокол упражнений

Сбор данных будет проводиться в двух отдельных 30-минутных сессиях упражнений с интервалом в одну неделю:

Сессия 1: Участники будут ходить на беговой дорожке с целевой частотой сердечных сокращений в течение 30 минут.

Сессия 2: Через неделю участники будут выполнять 30 минут езды на велоэргометре с аналогичной частотой сердечных сокращений.

Все процедуры, за исключением типа упражнений, будут идентичными между сессиями. Участники будут посещать лабораторию в одно и то же время дня, чтобы избежать суточных вариаций. Между сессиями будет предоставлен минимальный недельный период отдыха для минимизации эффектов переноса.

Процедура забора крови Постоянный венозный катетер будет введен в локтевую ямку любой руки. Чтобы минимизировать влияние предшествующей физической активности, участники будут отдыхать в положении лежа на спине в течение 30 минут по прибытии.

Образцы крови будут собираться в следующие моменты времени:

После 30-минутного периода отдыха (базовый уровень) Сразу после 30-минутной сессии упражнений Через 30 минут после упражнений Через 60 минут после упражнений Та же процедура будет повторена во второй сессии (езда на велосипеде). Сбор и анализ образцов крови Периферические образцы крови будут собираться в биохимические пробирки с гелем. Каждый раз будет собираться примерно 2–2,5 мл крови (около половины стандартной пробирки).

После свертывания при комнатной температуре (20–30 минут) образцы будут центрифугированы при 3500 об/мин в течение 10 минут при +4°C для получения сыворотки. Образцы сыворотки будут храниться при -80°C до анализа.

Измерение белка Уровни белка в сыворотке будут измеряться с использованием наборов ELISA в соответствии с инструкциями производителя. Будет использован спектрофотометр Multiskan Go (Thermo Fisher Scientific, Финляндия). Измерения будут анализироваться с помощью программного обеспечения Thermo Scientific SkanIt, а концентрации белков будут определяться путем сравнения со стандартными кривыми.

Анализируемые белки Beclin-1 LC3 ATG3