Valutazione dei Biomarcatori Autofagici Sierici nella Risposta Acuta alla Camminata e al Ciclismo in Individui Maschi Sani

Obiettivo dello Studio L'obiettivo di questo studio è valutare gli effetti acuti della camminata e del ciclismo sui biomarcatori fisiologici sierici associati all'autofagia (Beclin-1, LC3 e ATG3).

Studi precedenti hanno principalmente indagato le variazioni dei livelli dei biomarcatori dopo un singolo tipo di esercizio. Pertanto, gli effetti dei regimi di esercizio con diverse caratteristiche di carico meccanico sui biomarcatori circolanti correlati all'autofagia non sono sufficientemente compresi.

Questo studio mira a esaminare comparativamente gli effetti acuti di due diversi regimi di esercizio – camminata e ciclismo – sui biomarcatori sierici associati all'autofagia.

Ipotesi H0: Non vi è alcuna variazione nei livelli sierici di Beclin-1, LC3 e ATG3 dopo camminata e ciclismo.

H1: Vi è una variazione nei livelli sierici di Beclin-1, LC3 e ATG3 dopo camminata e ciclismo.

Criteri di Inclusione Volontari maschi sani di età compresa tra 18-35 anni Individui che svolgono attività fisica almeno 30 minuti al giorno, 2-3 giorni alla settimana Individui senza problemi di salute noti

Criteri di Esclusione Individui con lesioni acute o croniche agli arti inferiori unilaterali/bilaterali Individui con disturbi muscoloscheletrici agli arti inferiori unilaterali/bilaterali Individui che hanno subito interventi chirurgici che coinvolgono le articolazioni dell'anca e/o del ginocchio Individui con condizioni cardiopolmonari che impedirebbero loro di svolgere esercizio fisico

Metodo di Ricerca Lo studio inizierà dopo aver ottenuto l'approvazione etica. Saranno inclusi un totale di 20 volontari maschi sani di età compresa tra 18-35 anni, fisicamente attivi (almeno 30 minuti, 2-3 volte a settimana) e senza problemi di salute noti.

Per evitare gli effetti di condizioni mediche pregresse, saranno esclusi individui con lesioni acute o croniche agli arti inferiori, disturbi muscoloscheletrici o una storia di chirurgia dell'anca e/o del ginocchio.

Ai partecipanti verrà chiesto di ridurre al minimo tutte le attività sportive 48 ore prima delle sessioni di valutazione; tuttavia, saranno consentite le normali attività quotidiane come camminare e salire le scale. Sarà inoltre consigliato loro di mantenere le loro consuete routine quotidiane e consumare gli stessi tipi di cibo nei giorni di valutazione.

Peso corporeo, indice di massa corporea (BMI), età e frequenza cardiaca saranno registrati prima e dopo le sessioni di esercizio. L'intensità dell'esercizio sarà determinata in base alla frequenza cardiaca (FC), calcolata come:

Limite inferiore: FC = (220 - età) × 50% Limite superiore: FC = (220 - età) × 85% [8]

La frequenza cardiaca sarà misurata posizionando l'indice e il medio sull'arteria carotide per 15 secondi, e il valore sarà moltiplicato per quattro. Il protocollo di esercizio di 30 minuti sarà composto da:

Primi 5 minuti: limite inferiore di FC Successivi 20 minuti: limite superiore di FC Ultimi 5 minuti: limite inferiore di FC Misure Antropometriche Il peso corporeo sarà misurato utilizzando una bilancia digitale con sensibilità di 0,1 kg, e l'altezza sarà misurata utilizzando uno stadiometro digitale. I partecipanti saranno a piedi nudi, indossando solo pantaloncini, con le ginocchia completamente estese, i talloni uniti e in posizione eretta.

Protocollo di Esercizio

La raccolta dei dati sarà condotta in due sessioni di esercizio separate di 30 minuti, distanziate di una settimana:

Sessione 1: I partecipanti cammineranno su un tapis roulant alla frequenza cardiaca target per 30 minuti.

Sessione 2: Una settimana dopo, i partecipanti eseguiranno 30 minuti di ciclismo su un cicloergometro a una frequenza cardiaca simile.

Tutte le procedure, ad eccezione del tipo di esercizio, saranno identiche tra le sessioni. I partecipanti si presenteranno in laboratorio alla stessa ora del giorno per evitare variazioni circadiane. Un periodo di riposo minimo di una settimana sarà fornito tra le sessioni per minimizzare gli effetti di carryover.

Procedura di Prelievo del Sangue Un catetere venoso permanente sarà inserito nella fossa cubitale di uno dei bracci. Per minimizzare gli effetti dell'attività fisica precedente, i partecipanti riposeranno in posizione supina per 30 minuti all'arrivo.

I campioni di sangue saranno raccolti nei seguenti tempi:

Dopo il periodo di riposo di 30 minuti (baseline) Immediatamente dopo la sessione di esercizio di 30 minuti 30 minuti dopo l'esercizio 60 minuti dopo l'esercizio La stessa procedura sarà ripetuta nella seconda sessione (ciclismo). Raccolta e Analisi dei Campioni di Sangue Campioni di sangue periferico saranno raccolti in provette per biochimica contenenti gel. Verranno raccolti approssimativamente 2-2,5 mL di sangue (circa metà di una provetta standard) ogni volta.

Dopo la coagulazione a temperatura ambiente (20-30 minuti), i campioni saranno centrifugati a 3500 rpm per 10 minuti a +4°C per ottenere il siero. I campioni di siero saranno conservati a -80°C fino all'analisi.

Misurazione delle Proteine I livelli proteici sierici saranno misurati utilizzando kit ELISA secondo le istruzioni del produttore. Sarà utilizzato uno spettrofotometro Multiskan Go (Thermo Fisher Scientific, Finlandia). Le misurazioni saranno analizzate utilizzando il software Thermo Scientific SkanIt, e le concentrazioni proteiche saranno determinate confrontandole con curve standard.

Proteine Analizzate Beclin-1 LC3 ATG3