Trichomoniáza: Genotypové a fenotypové korelace u afroamerických žen

Navzdory vážným důsledkům pro veřejné zdraví, jeho rozšířené prevalenci, stoupající rezistenci vůči lékům a selháním léčby se pro studium úlohy genotypu T. vaginalis při přenosu, virulenci, výskytu smíšených infekcí a šíření lékové rezistence, primárně kvůli nedostatek vhodných testů pro rychlou typizaci kmenů. Dříve používané genotypizační techniky pro Trichomonas jsou nedostatečné kvůli problémům s rychlostí analýzy, citlivostí a reprodukovatelností mezi různými laboratořemi. Multilocus sekvenční typizace (MLST) kombinuje rychlost, citlivost, přenositelnost, přesnost a spolehlivost stanovením polymorfismu nukleotidové sekvence (SNP) přítomných v malých fragmentech DNA (300–400 nt), které jsou amplifikovány polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) z řady ( obvykle 6-7) neutrálně vybraných provozních genů. MLST přiděluje číslo alelového fragmentu (AFN) pro každý jedinečný SNP nebo kombinaci SNP přítomných v genovém fragmentu a používá je k identifikaci jedinečných typů sekvencí (ST) na základě kombinací AFN ve sbírce všech analyzovaných genů. MLST se široce používá ke studiu epidemiologie, struktury populace, virulence a evoluce u patogenních bakterií, ale pouze u hub mezi eukaryoty, kvůli obtížnosti interpretace dat MLST u diploidních organismů. T. vaginalis se však liší od ostatních eukaryot tím, že má stabilní haploidní sadu šesti chromozomů, a výzkumníci vyvinuli genotypizační systém MLST pro klinické izoláty T. vaginalis. Data (AFN a ST) generovaná pro každý kmen T. vaginalis námi vyvinutým schématem MLST budou uložena ve volně přístupné internetové databázi. Toto schéma MLST pak bude použito ke zkoumání vztahů mezi genotypy kmenů a klinickými, epidemiologickými a fyziologickými projevy trichomoniázy.

Trichomoniáza se vyznačuje širokým spektrem klinických projevů a následků onemocnění. Tato klinická variabilita je doprovázena vysokým stupněm genetické diverzity u klinických izolátů Trichomonas vaginalis, jak jsme původně prokázali a potvrdili jiní. Výzkumníci předpokládají, že korelace mezi genotypem a klinickou prezentací platí pro trichomoniázu a že izoláty T. vaginalis se liší ve své schopnosti klinického onemocnění, závažnosti, lékové rezistenci a následcích onemocnění. Na podporu několika studií (10–40 pacientek) prokazuje statisticky významnou korelaci mezi genetickou příbuzností izolátů T. vaginalis za použití techniky náhodné amplifikované polymorfní DNA (RAPD) s jejich klinickým obrazem. Byly také popsány korelace mezi závažností onemocnění u trichomoniázy a in vitro fenotypovými vlastnostmi, jako je cytoadherence, cytotoxicita a exprese proteinu cysteinové proteinázy 30 kilodaltonů (kDa). U klinických izolátů T. vaginalis byly prokázány významné rozdíly v cytoadherenci k buněčným monovrstvám, rozdílné expresi proteinů, fagocytóze cílových buněk, schopnosti vyvíjet cytotoxické poškození na kultivovaných buňkách a patogenitě a mortalitě u myší, což ukazuje na širokou variabilitu přítomných vlastností virulence v izolátech Trichomonas. Výzkumníci také prokázali až čtyřnásobné rozdíly v aktivitě vylučované cysteinové proteázy mezi kultivovanými klinickými izoláty T. vaginalis. Shromážděné důkazy silně podporují korelaci mezi jednotlivými kmeny T. vaginalis a jejich schopností virulence.

Pro tuto specifickou studii při úvodní návštěvě/diagnostické návštěvě výzkumníci odeberou izoláty T. vaginalis doprovázené podrobným klinickým hodnocením, epidemiologickými informacemi a výsledky in vitro testování lékové rezistence. Tyto informace umožní vyšetřovatelům určit, zda konkrétní kmeny nebo skupiny kmenů (jak bylo stanoveno genotypizací MLST) jsou spojeny s asymptomatickou infekcí, klinickou závažností, rasou pacientů, selháním léčby, lékovou rezistencí, smíšenými infekcemi nebo sexuální anamnézou pomocí jednorozměrné a vícerozměrné analýzy. . To je významné, protože pozitivní asociace konkrétních kmenů nebo skupin kmenů s těmito faktory, jak výzkumníci očekávají, že zjistí, si vyžádají změny ve způsobu, jakým je trichomoniáza zvládána a léčena s ohledem na identifikované kmeny. Výzkumníci budou také nezávisle testovat tyto proměnné na vzájemné korelace, aby identifikovali proměnné nebo kombinace proměnných, které mohou být spojeny s klinickými projevy trichomoniázy.

Informace, které vyšetřovatelé shromáždí, také umožní lepší pochopení trichomoniázy mnoha dalšími způsoby. Vyšetřovatelé kultivují T. vaginalis při následných návštěvách testu vyléčení (TOC) na genotyp a určí jejich lékovou rezistenci, aby odlišili potenciální selhání léčby nebo konverzi na lékovou rezistenci (stejný genotyp jako původní návštěva) od opětovné infekce jiným kontaktu (jiný genotyp). To je zvláště významné pro HIV+ ženy, protože jejich infekce Trichomonas vaginalis je obtížnější vyléčit a T. vaginalis může přetrvávat, nedetekovatelný kultivací, aby se znovu objevil až o šest měsíců později. Trichomonas vaginalis je detekován při návštěvách TOC v mnohem vyšší míře (až 36 %) u HIV+ žen než u HIV- žen (8 %), přičemž většina těchto infekcí je připisována selhání léčby. Nedávné zprávy popisují přetrvávající, nedetekované infekce T. vaginalis kultivované 3 a 6 měsíců po počátečním negativním výsledku TOC u žen, které neuvádějí žádné intervenující sexuální kontakty. To je významné, protože korelace genotypu kmene s přetrvávající infekcí bude identifikovat HIV+ jedince, kteří potřebují vícenásobné TOC návštěvy, použití citlivějších diagnostických testů a možná delší léčebné cykly.