Precizní medicína pro Sng / kontrolu bolesti (SNG)

Bolest je definována jako „nepříjemný smyslový a emocionální zážitek spojený se skutečným nebo potenciálním poškozením tkáně nebo popsaný z hlediska takového poškození“ Mezinárodní asociací pro studium bolesti (IASP). Poruchy pohybového aparátu jsou nejen nejčastější příčinou chronických bolestí/bolestí, ale mají také za následek významnou invaliditu u přibližně 50 % pacientů v USA. Navíc, protože tyto poruchy jsou nejčastější příčinou silné, dlouhodobé bolesti a invalidity u starších osob nad 65 let. V praxi medicíny bolesti používají lékaři převážně multimodální léčbu, včetně léků, fyzikálních prostředků a injekcí, aby zmírnili nepohodlí pacientů.

V minulých letech náš tým dosáhl určitých úspěchů, které ospravedlnily hledání genetických variant pro vývoj nového algoritmu léčby bolesti.

(1) Analgezie LLLT je prostřednictvím TRPV1. (2) Analgezie terapeutickým ultrazvukem je přes ASIC3. (3) Injekce dextrózy snížila chronickou bolest svalů prostřednictvím ASIC1a. (4) Biomarker pro bolest/bolest u fibromyalgie.

Podle klinického výsledku někteří pacienti dobře reagovali na fyzikální látky a někteří preferovali injekce. Genetické varianty výše uvedených genů mohou být určujícími faktory rozdílných terapeutických účinků. Trvalo však asi 4–8 týdnů, než pacient přešel z jedné možnosti léčby na jinou. Pokud vyšetřovatelé dokážou určit optimální léčebnou modalitu pomocí genetických biomarkerů, průběh léčby a celková rozloha se hodně sníží.

Vyšetřovatelé předpokládají, že genetické varianty navrhovaných genů (TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TREK1TASK2 , P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2) by mohly být prognostickými biomarkery léčby bolesti. Naše konkrétní cíle jsou:

1. Vytvořit přístup založený na sekvenování nové generace (NGS) k nalezení genetických variant, které mohou určovat odpověď na modality léčby bolesti.
2. Najít možné metabolomické a proteomické markery bolesti/bolesti.
3. Stanovit algoritmus přesné medicíny pro kontrolu bolesti pomocí genetických markerů.

Šest. design studie I Způsobilost pacientů Vyšetřovatelé přijmou pacienty z pobočky National Taiwan University Hospital Bei-Hu.

Kritéria zařazení: (1) Věk mezi 20-100 lety. (2) Diagnostikováni jako pacienti se syndromem myofasciální bolesti a ochotni podstoupit léčbu (včetně LLLT, terapeutického ultrazvuku a lokální injekční terapie dextrózou). Diagnóza MPS byla potvrzena hlavním zkoušejícím pomocí kritérií napjatého pruhu, spouštěcího bodu a vyzařující bolesti.

Kritéria vyloučení: Vyloučeni byli ti, kteří měli aktivní infekci, malignitu a hematologická onemocnění. Pacienti, kteří dostali lokální injekci do horního trapézu během 3 měsíců, jsou rovněž vyloučeni.

II Návrh a tok studie

1. Po získání informovaného souhlasu jsou shromážděny základní demografické údaje, včetně věku, pohlaví, zaměstnání, úrovně vzdělání a minulé lékařské historie způsobilých pacientů.
2. Způsobilí pacienti nejprve dostali LLLT s vlnovou délkou 685 nm a výkonem 30 mW při hustotě energie 8 J/cm2 ve spouštěcím bodě horního trapézového svalu. Bolest VAS před a po léčbě a VAS-sng se shromažďují pro stanovení fenotypu LLLT.
3. Poté jsou náhodně rozděleni do dvou skupin (40 subjektů v každé skupině): A. skupina pro terapeutický ultrazvuk; B. proloterapeutická skupina. Skupina A přijímá 1 MHz terapeutický ultrazvuk po dobu 5 minut s frekvencí 2-3krát týdně na bolestivý horní trapézový sval. Skupina B dostává hypertonickou proloterapii v perimysiu horního trapézového svalu. Injekční prostředek je 5 ml 5% roztoku dextrózy. Aby se zajistilo, že jehla nebyla v krevní cévě, byla jehla před injekcí odsáta. Stejný lékař (hlavní zkoušející) podává injekci všem pacientům, aby se předešlo variabilitě mezi lékaři. Nebyla podána žádná jiná medikace nebo fyzikální modalita, aby se předešlo interferenci v účinnosti v obou skupinách.
4. Rekrutovaní pacienti dostanou hodnocení před a po injekci a 2 týdny po injekci. Primárním výsledkem je VAS-pain a VAS-sore (vizuální analogová škála) se skóre 0-100, kde 100 je hodnota představující nejvyšší stupeň bolesti. Sekundárními výstupy jsou práh bolesti, svalový tonus a dotazník SF-36-a se skládá z 36 položek a 8 domén, které se zabývají tím, jak pacient vnímá jejich kvalitu života. Vzorky žilní krve a moči byly odebrány při první návštěvě a 2týdenní návštěvě. Vzorky krve byly označeny anonymizovaným ID číslem, odstředěny a skladovány při -80 ºC v uzamčeném mrazáku až do doby budoucího zpracování. Buffy coat se po centrifugaci oddělí a také uskladní. Vzorky moči byly rozděleny na alikvoty a skladovány při -80 °C v uzamčeném mrazáku pro budoucí analýzu.
5. Záchranná terapie (zkřížená léčba): Pokud účastník není spokojen s léčbou v prvním kole a zlepšení VAS je menší než 1,0, má nárok na záchrannou terapii – léčbu v druhé skupině. A vrátí se na kliniku na další 2 týdny. Výsledné proměnné budou shromážděny také při 3. návštěvě.

(1) Extrakce DNA a sekvenování a genotypizace založené na NGS Genomová DNA bude extrahována z mononukleárních buněk periferní krve účastníků pomocí soupravy Gentra Puregene podle protokolu výrobce a podrobena agarózovému gelu a O.D. poměrové testy k potvrzení jeho čistoty a koncentrace. DNA bude fragmentována pomocí Covaris s cílem dosáhnout maximální délky 800 bp. Knihovny Illumina budou generovány z gDNA pomocí TruSeq Library Preparation Kit.

Sondy pro zachycení DNA budou přizpůsobeny tak, aby cílily na TRPV1, ASIC1a, ASIC3, Tac1, COMT, TCL1A, POMC, RGS4, ASIC2, ASIC4, TRPA1, NK1R, G2A, GPR4, OGR1, TDAG8, TASK1, TASK2, TASK3, TREK1, P2X2, P2X3, P2X5, TRPV4, KCNK1, NTSR1, NTSR2 a budou syntetizovány pomocí protokolu Roche KAPA HyperChoice. Budou zahrnuty všechny kódující oblasti a nekódující oblasti (promotory, introny, 5' a 3' netranslatované oblasti) těchto 8 genů.

Obohacení cílové oblasti NGS bude použito k obohacení/zachycení cílové oblasti (~148 Kb). Obohacené knihovny pak budou sekvenovány pomocí Illumina MiSeq, aby se vygenerovaly čtení párového konce o 300 bp. Očekávaná hloubka cílových oblastí bude v průměru 200x.

(2) Metabolomická a proteomická analýza

1. Stručně, LC-MS analýzy moči a séra za použití systému Agilent 1290 UPLC (kolona ACQUITY UPLC HSS T3, 2,1 × 100 mm; 1,8 um; Waters, Milford, MA, USA) ve spojení s 6540-Quadrupole-Time- letového (QTOF) hmotnostního systému (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). MS raw soubory byly převedeny do formátu mzXML pomocí Trapperu (ISB) a zpracovány TIPick, interním balíčkem. Po zpracování TIPick byla provedena normalizace na základě měřítka podle celkového množství iontů z každého souboru dat UHPLC-MS.
2. Bylo provedeno a podrobně popsáno LC-MS lipidomické profilování. Stručně, lipidomické profilování bylo prováděno na ZORBAX Eclipse Plus C18 (2,1 x 100 mm, 1,8 µm, Agilent Technologies, Waldbronn, Německo) pro QTOF, stejně jako mobilní fáze A sestávala z 0,1% vodné kyseliny mravenčí a 10 mM octanu amonného a mobilní fáze B sestávala z 0,1% kyseliny mravenčí a 10 mM octanu amonného v ACN/isopropylalkohol (50/50). Autosampler a kolonová pec byly udržovány při 4 °C a 55 °C, v daném pořadí. Objem nástřiku byl 5 μl. Akvizice MS byla provedena v režimu skenování prekurzorových iontů (PIS) a režimu monitorování více reakcí (MRM).
3. Všechna nezpracovaná data UPLC-MS byla převedena do formátu mzXML pomocí Trapperu (ISB) a normalizována pomocí TIPick, interního balíčku, stejně jako zvýšení píku a pík vybraných pro cílové metabolity. Vlastní databáze sfingomyelinů (SM), lysofosfatidylcholinu (LysoPC), ceramidů (Cer), fosfatidylcholinů (PC), fosfatidylinositolu (PI), fosfatidylethanolaminu (PE) a cerebrosidu (CB) v Metabolomics Core Laboratory, Center of Genomic Pro screening byla použita medicína, National Taiwan University.