Mezenchymální kmenové buňky pro léčbu RS

Tato studie je navržena jako fáze 1/2 otevřená klinická studie bezpečnosti. V první fázi je zahrnuto 15 souhlasných pacientů s RS.

Kritéria pro zařazení:

Souhlasící pacienti splnili následující 4 kritéria pro zařazení do této studie:

1. klinická kritéria Posera a spol. pro definitivní RS;
2. muži a netěhotné ženy ve věku 25 až 65 let;
3. trvání onemocnění delší než 5 let; a
4. nereagování na aktuálně dostupná a registrovaná léčiva pro RS (tj. interferony, glatiramer acetát [Copaxone] a imunosupresiva), což se projevuje zvýšením skóre EDSS alespoň o 1 stupeň během posledního roku nebo výskytem alespoň 2 velkých relapsů RS během stejného období.

Kritéria vyloučení:

1. pacienti, kteří byli léčeni cytotoxickými léky (tj. cyklofosfamidem, mitoxantronem a azathioprinem) během 3 měsíců před studií;
2. pacienti s významným srdečním, renálním nebo jaterním selháním nebo jakýmkoli jiným onemocněním, které může interferovat se schopností interpretovat výsledky studie;
3. pacienti s aktivní infekcí; a
4. pacientů, kteří vykazovali závažný kognitivní pokles nebo nebyli schopni porozumět a podepsat informovaný souhlas.

Aspirace kostní dřeně se provádí v krátké celkové anestezii s punkcí z hřebene kyčelní kosti zadní horní v poloze pacienta na levém nebo pravém boku. Od každého pacienta se získá přibližně 200 ml inokula kostní dřeně.

Příprava a kultivace MSC Kultura purifikovaných MSC se připravuje za aseptických podmínek (pozitivní tlakové čisté prostory) za použití filtrovaného sterilizovaného Eagle média modifikovaného Dulbeccem s nízkou hladinou glukózy (Qiagen, Valencia, Kalifornie) doplněného 10% fetálním hovězím sérem, 1% L-glutamin a 1% roztok penicilin-streptomycinnystatinu (vše od Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Izrael).

Mezenchymální buňky se kultivují po dobu 40 až 60 dnů, dokud nedosáhnou konfluence, a poté se sklidí a kryokonzervují v 10% médiu obsahujícím dimethylsulfoxid v kapalném dusíku (-196 °C). Po 2 týdnech se odebere vzorek pro testování sterility a kontrolu kvality. Po potvrzení sterility se MSC přenesou do laboratoře na suchém ledu, rozmrazí se ve vodní lázni o teplotě 37 °C a dvakrát se promyjí normálním fyziologickým roztokem, aby se odstranil veškerý zbytkový dimethylsulfoxid. Buňky jsou poté resuspendovány v normálním fyziologickém roztoku v koncentraci 10x106/ml až 15x106/ml. Dvě třetiny celkového počtu buněk (obvykle 60x106 až 100x106) jsou injikovány intratekálně a jedna třetina intravenózně. Vzorek buněk, které mají být injikovány, je testován analýzou fluorescenčně aktivovaného třídění buněk (FACS); buňky (98 %) by měly exprimovat povrchové markery charakteristické pro MSC (CD29, CD73, CD90, CD105 a CD166) a být negativní na CD34, CD45 a CD14.

Protokol léčby Všichni pacienti dostanou intratekální injekci standardní lumbální punkcí (průměr 1 milion buněk na kg tělesné hmotnosti) a intravenózní injekci 0,3-1 milionu buněk na kg, intravenózně.

Pro pacienty, kteří dokončí první fázi této studie, je naplánována prodloužená fáze jako otevřená prospektivní studie s opakovanými intratekálními nebo intravenózními injekcemi autologního MSC u pacientů z počáteční studie a 10 dalšími (celkem až 24 pacientů) s progresivními formami RS (sekundárně progresivní, primárně progresivní nebo relabující-progresivní). Pacienti by měli být definováni jako selhání první a druhé linie imunomodulační léčby, u kterých došlo ke zhoršení (nejméně 0,5 stupně na stupnici EDSS) během roku předcházejícího jejich zařazení do naší studie nebo měli alespoň jeden velký relaps bez dostatečného zotavení. Pacienti budou léčeni 1x10 miliony MSC na kg tělesné hmotnosti, intratekálně a intravenózně a následně až 8 cykly IT nebo IV injekcí MSC (ve stejné dávce), v intervalech 6-12 měsíců. Délka soudního řízení je 4 roky.

Pacienti budou sledováni každé 3 měsíce po celou dobu trvání studie za účelem posouzení bezpečnosti a změn ve skóre postižení (EDSS).

Imunologická analýza bude provedena ve 4 časových bodech (den 1, měsíc 1, měsíc 3 a měsíc 6) po prvním MSC ošetření a bude zahrnovat analýzu fluorescenčního třídění buněk (FACS) pro vyhodnocení podílů lymfocytů exprimujících markery imunitního systému. aktivace nebo fenotypu regulačních buněk.