Mesenkymaaliset kantasolut MS-taudin hoitoon

Tämä tutkimus on suunniteltu vaiheen 1/2 avoimeksi kliiniseksi tutkimukseksi. Ensimmäisessä vaiheessa mukana on 15 suostuvaa MS-potilasta.

Sisällyttämiskriteerit:

Suostumuspotilaat täyttivät seuraavat 4 osallistumiskriteeriä tähän tutkimukseen:

1. Poser et al. kliiniset kriteerit selvälle MS:lle;
2. 25–65-vuotiaat miehet ja ei-raskaana olevat naiset;
3. taudin kesto yli 5 vuotta; ja
4. ei reagoi tällä hetkellä saatavilla oleviin ja rekisteröidyihin MS-lääkkeisiin (eli interferoneihin, glatirameeriasetaattiin [Copaxone] ja immunosuppressoriin), mikä ilmenee vähintään 1 asteen nousuna EDSS-pisteissä viimeisen vuoden aikana tai esiintymisenä vähintään 2 suuren MS-taudin uusiutumista saman ajanjakson aikana.

Poissulkemiskriteerit:

1. potilaat, joita hoidettiin sytotoksisilla lääkkeillä (eli syklofosfamidilla, mitoksantronilla ja atsatiopriinilla) kolmen kuukauden aikana ennen tutkimusta;
2. potilaat, joilla on merkittävä sydämen, munuaisten tai maksan vajaatoiminta tai mikä tahansa muu sairaus, joka voi häiritä kykyä tulkita tutkimuksen tuloksia;
3. potilaat, joilla on aktiivinen infektio; ja
4. potilaat, joilla oli vakava kognitiivinen heikkeneminen tai jotka eivät pystyneet ymmärtämään ja allekirjoittamaan tietoon perustuvaa suostumusta.

Luuytimen aspiraatio suoritetaan lyhyessä yleisanestesiassa pistoksena suoliluun harjanteen takaosasta, kun potilas makasi vasemmalla tai oikealla lateraalisessa asennossa. Jokaiselta potilaalta otetaan noin 200 ml luuytimen ymppiä.

MSC:n valmistus ja viljely Viljelmä puhdistetuista MSC:istä valmistetaan aseptisissa olosuhteissa (positiivisesti paineistetut puhdastilat) käyttämällä suodatettua steriloitua Dulbecco-modifioitua Eagle-elatusainetta, jossa on alhainen glukoositaso (Qiagen, Valencia, Kalifornia), jota on täydennetty 10 % naudan sikiön seerumilla, 1 %. L-glutamiini ja 1 % penisilliini-streptomysiini-nystatiiniliuos (kaikki yhtiöltä Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Israel).

Mesenkymaalisia soluja viljellään 40-60 päivää, kunnes ne saavuttavat konfluenssin, minkä jälkeen ne kerätään ja kylmäsäilytetään 10 % dimetyylisulfoksidia sisältävässä väliaineessa nestetypessä (-196 °C). Kahden viikon kuluttua otetaan näyte steriiliysmittausta ja laadunvalvontaa varten. Kun steriiliys on varmistettu, MSC:t siirretään laboratorioon kuivajäällä, sulatetaan 37 °C:n vesihauteessa ja pestään kahdesti normaalilla suolaliuoksella mahdollisen jäljellä olevan dimetyylisulfoksidin poistamiseksi. Sitten solut suspendoidaan uudelleen normaaliin suolaliuokseen konsentraatiolla 10 x 106/ml - 15 x 106/ml. Kaksi kolmasosaa solujen kokonaismäärästä (yleensä 60 x 106 - 100 x 106) injektoidaan intratekaalisesti ja yksi kolmasosa suonensisäisesti. Näyte injektoitavista soluista testataan fluoresenssiaktivoidulla solulajittelijalla (FACS) -analyysillä; solujen (98 %) pitäisi ilmentää MSC:ille ominaisia ​​pintamarkkereita (CD29, CD73, CD90, CD105 ja CD166) ja olla negatiivisia CD34:lle, CD45:lle ja CD14:lle.

Hoitoprotokolla Kaikki potilaat saavat intratekaalisen injektion tavanomaisella lannepunktiolla (keskimäärin 1 miljoona solua painokiloa kohti) ja suonensisäisenä injektiona 0,3–1 miljoonaa solua kiloa kohden suonensisäisesti.

Jatkovaihe on suunniteltu potilaille, jotka päättävät tämän tutkimuksen ensimmäisen vaiheen avoimena prospektiivisena tutkimuksena, jossa toistuvat intratekaaliset tai suonensisäiset autologisen MSC-injektiot alkuperäisen tutkimuksen potilaille ja 10 lisävaiheeseen (yhteensä enintään 24 potilasta), joilla on eteneviä MS-muotoja. (toissijaisesti progressiivinen, ensisijaisesti progressiivinen tai uusiutuva-progressiivinen). Potilaat on määriteltävä epäonnistuneiksi immunomodulatoristen hoitojen ensimmäisessä ja toisessa linjassa, jotka heikkenevät (vähintään 0,5 astetta EDSS-asteikolla) vuoden aikana ennen heidän sisällyttämistään tutkimukseemme tai joilla oli vähintään yksi vakava relapsi ilman riittävää toipumista. Potilaita hoidetaan 1x10 miljoonalla MSC:llä painokiloa kohden intratekaalisesti ja suonensisäisesti ja sen jälkeen jopa 8 IT- tai IV-ruiskeen MSC-injektiota (samalla annoksella) 6-12 kuukauden välein. Kokeen kesto on 4 vuotta.

Potilaita seurataan 3 kuukauden välein koko tutkimuksen ajan turvallisuusarvioinnin ja vammaisuuspisteiden (EDSS) muutoksien osalta.

Immunologinen analyysi suoritetaan 4 ajankohdassa (päivä 1, kuukausi 1, kuukausi 3 ja kuukausi 6) ensimmäisen MSC-hoidon jälkeen, ja se sisältää fluoresoivan solulajittelun (FACS) analyysin immuunimarkkereita ilmentävien lymfosyyttien osuuksien arvioimiseksi. aktivaatio tai säätelevä solufenotyyppi.