Mesenkymale stamceller til behandling af MS

Denne undersøgelse er designet som et fase 1/2 åben-sikkerhed klinisk forsøg. I den første fase er 15 samtykkende patienter med MS inkluderet.

Inklusionskriterier:

Patienter, der samtykkede, opfyldte følgende 4 inklusionskriterier for denne undersøgelse:

1. de kliniske kriterier af Poser et al for sikker MS;
2. mænd og ikke-gravide kvinder i alderen 25 til 65 år;
3. varighed af sygdommen længere end 5 år; og
4. manglende respons på de aktuelt tilgængelige og registrerede midler mod MS (dvs. interferoner, glatirameracetat [Copaxone] og immunsuppressorer), som manifesteret ved en stigning på mindst 1 grad i EDSS-scoren i løbet af det seneste år eller udseendet af mindst 2 større MS-tilbagefald i samme periode.

Ekskluderingskriterier:

1. patienter, der blev behandlet med cytotoksisk medicin (dvs. cyclophosphamid, mitoxantron og azathioprin) i løbet af de 3 måneder før forsøget;
2. patienter med signifikant hjerte-, nyre- eller leversvigt eller enhver anden sygdom, der kan forstyrre evnen til at fortolke undersøgelsens resultater;
3. patienter med en aktiv infektion; og
4. patienter, der udviste alvorlig kognitiv tilbagegang eller ikke var i stand til at forstå og underskrive det informerede samtykke.

Knoglemarvsaspiration udføres under kort generel anæstesi med punktering fra den posteriore superior hoftekam, mens patienten lå i venstre eller højre sideleje. Der opnås ca. 200 ml knoglemarvspode fra hver patient.

MSC-forberedelse og -kultur En kultur af oprensede MSC'er fremstilles under aseptiske forhold (rene rum under positivt tryk) ved anvendelse af filtreret steriliseret Dulbecco-modificeret Eagle-medium med lave glucoseniveauer (Qiagen, Valencia, Californien) suppleret med 10% føtalt bovint serum, 1% L-glutamin og 1% penicillin-streptomycinnystatin-opløsning (alle fra Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Israel).

Mesenkymale celler dyrkes i 40 til 60 dage, indtil de når sammenflydning, og høstes derefter og kryokonserveres i 10% dimethylsulfoxidholdigt medium i flydende nitrogen (-196°C). Efter 2 uger udtages en prøve til sterilitetstest og kvalitetskontrol. Efter sterilitet bekræftet, overføres MSC'erne til laboratoriet på tøris, optøs i et 37°C vandbad og vaskes to gange med normal saltvandsopløsning for at fjerne eventuelle resterende dimethylsulfoxid. Cellerne resuspenderes derefter i normalt saltvand ved en koncentration på 10x106/ml til 15x106/ml. To tredjedele af det samlede antal celler (normalt 60x106 til 100x106) injiceres intrathecalt og en tredjedel intravenøst. En prøve af cellerne, der skal injiceres, testes ved fluorescensaktiveret cellesorteringsanalyse (FACS); celler (98%) skal udtrykke overflademarkørerne, der er karakteristiske for MSC'er (CD29, CD73, CD90, CD105 og CD166) og være negative for CD34, CD45 og CD14.

Behandlingsprotokol Alle patienter får en intrathekal injektion via en standard lumbalpunktur (gennemsnit af 1 million celler pr. kg kropsvægt) og en intravenøs injektion på 0,3-1 million celler pr. kg, intravenøst.

En forlængelsesfase er planlagt for patienter, der afslutter første fase af dette forsøg som et åbent prospektivt studie med gentagne intrathekale eller intravenøse injektioner af autolog MSC i patienter fra det indledende forsøg og 10 yderligere (i alt op til 24 patienter) med progressive former for MS (sekundær progressiv, primær progressiv eller recidiverende-progressiv). Patienter bør defineres som svigt af første og anden linje af immunmodulerende behandlinger, der oplevede forværring (mindst 0,5 grader i EDSS-skalaen) i løbet af året forud for deres optagelse i vores undersøgelse eller havde mindst ét ​​større tilbagefald uden tilstrækkelig bedring. Patienterne vil blive behandlet med 1x10 millioner MSC pr. kg kropsvægt, intratekalt og intravenøst ​​og efterfølgende med op til 8 forløb med IT- eller IV-injektioner af MSC (i samme dosis), med intervaller på 6-12 måneder. Retssagens varighed er 4 år.

Patienterne vil blive fulgt op hver 3. måned i hele forsøgets varighed, for sikkerhedsvurdering og ændringer i handicapscore (EDSS).

Immunologisk analyse vil blive udført på 4 tidspunkter (dag 1, måned 1, måned 3 og måned 6) efter den første MSC-behandling og vil omfatte en fluorescerende cellesorteringsanalyse (FACS) for at evaluere proportionerne af lymfocytterne, der udtrykker immunmarkører aktivering eller af regulatorisk cellefænotype.