Mezenchymalne komórki macierzyste do leczenia SM

To badanie zostało zaprojektowane jako otwarte badanie kliniczne fazy 1/2 dotyczące bezpieczeństwa. W pierwszej fazie uwzględniono 15 wyrażających zgodę pacjentów ze stwardnieniem rozsianym.

Kryteria przyjęcia:

Wyrażający zgodę pacjenci spełniali następujące 4 kryteria włączenia do tego badania:

1. kliniczne kryteria Posera i wsp. dla określonego stwardnienia rozsianego;
2. mężczyźni i kobiety niebędące w ciąży w wieku od 25 do 65 lat;
3. czas trwania choroby dłuższy niż 5 lat; I
4. brak odpowiedzi na obecnie dostępne i zarejestrowane środki na stwardnienie rozsiane (tj. interferony, octan glatirameru [Copaxone] i leki immunosupresyjne), objawiający się wzrostem wyniku EDSS o co najmniej 1 stopień w ciągu ostatniego roku lub pojawieniem się co najmniej 2 głównych nawrotów stwardnienia rozsianego w tym samym okresie.

Kryteria wyłączenia:

1. pacjentów leczonych lekami cytotoksycznymi (tj. cyklofosfamidem, mitoksantronem i azatiopryną) w ciągu 3 miesięcy przed badaniem;
2. pacjenci ze znaczną niewydolnością serca, nerek lub wątroby lub jakąkolwiek inną chorobą, która może zakłócać zdolność do interpretacji wyników badania;
3. pacjenci z aktywną infekcją; I
4. pacjenci, którzy wykazywali poważne pogorszenie funkcji poznawczych lub nie byli w stanie zrozumieć i podpisać świadomej zgody.

Aspirację szpiku kostnego wykonuje się w krótkim znieczuleniu ogólnym z nakłuciem z grzebienia biodrowego tylnego górnego w pozycji leżącej na lewym lub prawym boku. Od każdego pacjenta pobiera się około 200 ml inokulum szpiku kostnego.

Przygotowanie i hodowla MSC Hodowlę oczyszczonych MSC przygotowuje się w warunkach aseptycznych (pomieszczenia czyste pod dodatnim ciśnieniem) przy użyciu filtrowanej, sterylizowanej pożywki Eagle zmodyfikowanej przez Dulbecco o niskim poziomie glukozy (Qiagen, Valencia, Kalifornia) uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą, 1% L-glutamina i 1% roztwór penicyliny-streptomycynystatyny (wszystkie z Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Izrael).

Komórki mezenchymalne są hodowane przez 40 do 60 dni, aż do osiągnięcia konfluencji, a następnie zbierane i konserwowane kriogenicznie w pożywce zawierającej 10% sulfotlenek dimetylu w ciekłym azocie (-196°C). Po 2 tygodniach pobierana jest próbka do badania sterylności i kontroli jakości. Po potwierdzeniu sterylności MSC przenosi się do laboratorium na suchym lodzie, rozmraża w łaźni wodnej o temperaturze 37°C i dwukrotnie przemywa normalnym roztworem soli w celu usunięcia wszelkich pozostałości sulfotlenku dimetylu. Następnie komórki ponownie zawiesza się w normalnej soli fizjologicznej w stężeniu od 10x106/ml do 15x106/ml. Dwie trzecie całkowitej liczby komórek (zwykle od 60x106 do 100x106) wstrzykuje się dooponowo, a jedną trzecią dożylnie. Próbkę komórek, które mają być wstrzyknięte, bada się metodą sortowania komórek aktywowanego fluorescencją (FACS); komórki (98%) powinny wykazywać ekspresję markerów powierzchniowych charakterystycznych dla MSC (CD29, CD73, CD90, CD105 i CD166) i być negatywne dla CD34, CD45 i CD14.

Protokół leczenia Wszyscy pacjenci otrzymują wstrzyknięcie dokanałowe poprzez standardowe nakłucie lędźwiowe (średnio 1 milion komórek na kg masy ciała) i dożylne wstrzyknięcie 0,3-1 miliona komórek na kg masy ciała.

Dla pacjentów kończących pierwszą fazę tego badania zaplanowano fazę przedłużenia jako otwarte badanie prospektywne z powtarzanymi dooponowymi lub dożylnymi wstrzyknięciami autologicznego MSC u pacjentów z badania początkowego i 10 dodatkowych (łącznie do 24 pacjentów) z postępującymi postaciami SM (wtórnie postępujące, pierwotnie postępujące lub nawracająco-progresywne). Pacjentów należy zdefiniować jako niepowodzeń pierwszej i drugiej linii leczenia immunomodulującego, u których wystąpiło pogorszenie (co najmniej 0,5 stopnia w skali EDSS) w ciągu roku poprzedzającego ich włączenie do naszego badania lub mieli co najmniej jeden poważny nawrót bez wystarczającego wyzdrowienia. Pacjenci będą leczeni 1x10 milionami MSC na kg masy ciała, dokanałowo i dożylnie, a następnie do 8 cykli wstrzyknięć IT lub IV (w tej samej dawce), w odstępach 6-12 miesięcy. Czas trwania procesu wynosi 4 lata.

Pacjenci będą obserwowani co 3 miesiące przez cały czas trwania badania, w celu oceny bezpieczeństwa i zmian w wynikach niepełnosprawności (EDSS).

Analiza immunologiczna zostanie przeprowadzona w 4 punktach czasowych (dzień 1, miesiąc 1, miesiąc 3 i miesiąc 6) po pierwszym podaniu MSC i będzie obejmować analizę metodą fluorescencyjnego sortowania komórek (FACS) w celu oceny proporcji limfocytów wykazujących ekspresję markerów immunologicznych aktywacji lub fenotypu komórki regulatorowej.