Cellule staminali mesenchimali per il trattamento della SM

Questo studio è concepito come una sperimentazione clinica di sicurezza aperta di fase 1/2. Nella sua prima fase, sono inclusi 15 pazienti consenzienti con SM.

Criterio di inclusione:

I pazienti consenzienti hanno soddisfatto i seguenti 4 criteri di inclusione per questo studio:

1. i criteri clinici di Poser et al per la SM definita;
2. uomini e donne non gravide di età compresa tra 25 e 65 anni;
3. durata della malattia superiore a 5 anni; E
4. mancata risposta agli agenti attualmente disponibili e registrati per la SM (vale a dire, interferoni, glatiramer acetato [Copaxone] e immunosoppressori), come manifestato da un aumento di almeno 1 grado nel punteggio EDSS durante l'ultimo anno o la comparsa di almeno 2 ricadute maggiori di SM durante lo stesso periodo.

Criteri di esclusione:

1. pazienti trattati con farmaci citotossici (cioè ciclofosfamide, mitoxantrone e azatioprina) durante i 3 mesi precedenti lo studio;
2. pazienti con significativa insufficienza cardiaca, renale o epatica o qualsiasi altra malattia che possa interferire con la capacità di interpretare i risultati dello studio;
3. pazienti con un'infezione attiva; E
4. pazienti che hanno mostrato un grave declino cognitivo o non sono stati in grado di comprendere e firmare il consenso informato.

L'aspirazione del midollo osseo viene eseguita in anestesia generale breve con puntura dalla cresta iliaca posteriore superiore mentre il paziente giaceva in posizione laterale sinistra o destra. Da ciascun paziente vengono prelevati circa 200 mL di inoculi di midollo osseo.

Preparazione e coltura delle MSC Una coltura di MSC purificate viene preparata in condizioni asettiche (camere pulite a pressione positiva) utilizzando terreno Eagle modificato Dulbecco filtrato sterilizzato con bassi livelli di glucosio (Qiagen, Valencia, California) integrato con 10% di siero bovino fetale, 1% L-glutammina e soluzione all'1% di penicillina-streptomicina- nistatina (tutte da Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Israele).

Le cellule mesenchimali vengono coltivate per 40-60 giorni, fino a raggiungere la confluenza, quindi raccolte e criopreservate in terreno contenente dimetilsolfossido al 10% in azoto liquido (-196°C). A 2 settimane viene prelevato un campione per il test di sterilità e il controllo di qualità. Dopo la conferma della sterilità, le MSC vengono trasferite in laboratorio su ghiaccio secco, scongelate in un bagno d'acqua a 37°C e lavate due volte con normale soluzione fisiologica per rimuovere ogni residuo di dimetilsolfossido. Le cellule vengono quindi risospese in soluzione salina normale a una concentrazione compresa tra 10x106/mL e 15x106/mL. Due terzi del numero totale di cellule (di solito da 60x106 a 100x106) vengono iniettati per via intratecale e un terzo per via endovenosa. Un campione delle cellule da iniettare viene testato mediante analisi FACS (fluorescence-activated cell sorter); le cellule (98%) dovrebbero esprimere i marcatori di superficie caratteristici delle MSC (CD29, CD73, CD90, CD105 e CD166) ed essere negative per CD34, CD45 e CD14.

Protocollo di trattamento Tutti i pazienti ricevono un'iniezione intratecale tramite una puntura lombare standard (media di 1 milione di cellule per kg di peso corporeo) e un'iniezione endovenosa di 0,3-1 milione di cellule per kg, per via endovenosa.

È prevista una fase di estensione per i pazienti che completano la prima fase di questo studio come studio prospettico aperto con ripetute iniezioni intratecali o endovenose di MSC autologhe in pazienti dello studio iniziale e altri 10 (in totale fino a 24 pazienti) con forme progressive di SM (secondario progressivo, primario progressivo o recidivante-progressivo). I pazienti dovrebbero essere definiti come fallimenti di prima e seconda linea di trattamenti immunomodulatori che hanno subito un deterioramento (almeno 0,5 gradi nella scala EDSS) durante l'anno precedente la loro inclusione nel nostro studio o hanno avuto almeno una ricaduta importante senza un recupero sufficiente. I pazienti saranno trattati con 1x10 milioni di MSC per kg di peso corporeo, per via intratecale ed endovenosa e successivamente con un massimo di 8 cicli di iniezioni IT o IV di MSC (alla stessa dose), a intervalli di 6-12 mesi. La durata del processo è di 4 anni.

I pazienti saranno seguiti ogni 3 mesi per l'intera durata della sperimentazione, per la valutazione della sicurezza e le modifiche nei punteggi di disabilità (EDSS).

L'analisi immunologica verrà eseguita in 4 punti temporali (giorno 1, mese 1, mese 3 e mese 6) dopo il primo trattamento con MSC e includerà un'analisi FACS (fluorescent cell sorter) per valutare le proporzioni dei linfociti che esprimono marcatori di immunoglobulina attivazione o del fenotipo cellulare regolatorio.