Mesenkymala stamceller för behandling av MS

Denna studie är utformad som en fas 1/2 klinisk prövning med öppen säkerhet. I den första fasen ingår 15 samtyckande patienter med MS.

Inklusionskriterier:

Patienter som samtyckte uppfyllde följande fyra inklusionskriterier för denna studie:

1. de kliniska kriterierna enligt Poser et al för definitiv MS;
2. män och icke-gravida kvinnor i åldern 25 till 65 år;
3. sjukdomens varaktighet längre än 5 år; och
4. underlåtenhet att svara på de för närvarande tillgängliga och registrerade medlen för MS (dvs interferoner, glatirameracetat [Copaxone] och immunsuppressorer), vilket manifesteras av en ökning med minst 1 grad i EDSS-poängen under det senaste året eller utseendet av minst 2 allvarliga MS-relapsar under samma period.

Exklusions kriterier:

1. patienter som behandlades med cytotoxiska läkemedel (dvs cyklofosfamid, mitoxantron och azatioprin) under de 3 månaderna före prövningen;
2. patienter med signifikant hjärt-, njur- eller leversvikt eller någon annan sjukdom som kan störa förmågan att tolka studiens resultat;
3. patienter med en aktiv infektion; och
4. patienter som visade allvarlig kognitiv försämring eller inte kunde förstå och underteckna det informerade samtycket.

Benmärgsaspiration utförs under kort generell anestesi med punktering från bakre höftbenskammen medan patienten låg i vänster eller höger sidoläge. Ungefär 200 ml benmärgsinokula erhålls från varje patient.

Beredning och odling av MSC En kultur av renade MSC:er framställs under aseptiska förhållanden (rena rum med positivt tryck) med användning av filtrerat steriliserat Dulbecco-modifierat Eagle-medium med låga glukosnivåer (Qiagen, Valencia, Kalifornien) kompletterat med 10 % fetalt bovint serum, 1 % L-glutamin och 1 % penicillin-streptomycinnystatinlösning (alla från Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Israel).

Mesenkymala celler odlas i 40 till 60 dagar, tills de når sammanflytning, och skördas sedan och kryokonserveras i 10 % dimetylsulfoxidinnehållande medium i flytande kväve (-196°C). Efter 2 veckor tas ett prov för sterilitetstestning och kvalitetskontroll. Efter att steriliteten har bekräftats överförs MSC:erna till laboratoriet på torris, tinas i ett 37°C vattenbad och tvättas två gånger med normal koksaltlösning för att avlägsna eventuell kvarvarande dimetylsulfoxid. Cellerna återsuspenderas sedan i normal saltlösning vid en koncentration av 10x106/ml till 15x106/ml. Två tredjedelar av det totala antalet celler (vanligtvis 60x106 till 100x106) injiceras intratekalt och en tredjedel intravenöst. Ett prov av cellerna som ska injiceras testas genom fluorescensaktiverad cellsorterare (FACS) analys; celler (98%) bör uttrycka ytmarkörerna som är karakteristiska för MSC (CD29, CD73, CD90, CD105 och CD166) och vara negativa för CD34, CD45 och CD14.

Behandlingsprotokoll Alla patienter får en intratekal injektion via en standard lumbalpunktion (i genomsnitt 1 miljon celler per kg kroppsvikt) och en intravenös injektion av 0,3-1 miljon celler per kg, intravenöst.

En förlängningsfas är planerad för patienter som slutför den första fasen av denna studie som en öppen prospektiv studie med upprepade intratekala eller intravenösa injektioner av autolog MSC hos patienter från den initiala studien och ytterligare 10 (totalt upp till 24 patienter) med progressiva former av MS (sekundär progressiv, primär progressiv eller skov-progressiv). Patienter bör definieras som misslyckanden i första och andra raden av immunmodulerande behandlingar som upplever försämring (minst 0,5 grader i EDSS-skalan) under året innan de inkluderades i vår studie eller hade åtminstone ett större återfall utan tillräcklig återhämtning. Patienterna kommer att behandlas med 1x10 miljoner MSC per kg kroppsvikt, intratekalt och intravenöst och därefter med upp till 8 kurer av IT- eller IV-injektioner av MSC (med samma dos), med 6-12 månaders intervall. Rättegångens varaktighet är 4 år.

Patienterna kommer att följas upp var tredje månad under hela försökets varaktighet, för säkerhetsbedömning och förändringar i funktionshinderspoäng (EDSS).

Immunologisk analys kommer att utföras vid fyra tidpunkter (dag 1, månad 1, månad 3 och månad 6) efter den första MSC-behandlingen och kommer att inkludera en fluorescerande cellsorterare (FACS) analys för att utvärdera proportionerna av lymfocyterna som uttrycker immunmarkörer aktivering eller av regulatorisk cellfenotyp.