Cellules souches mésenchymateuses pour le traitement de la SEP

Cette étude est conçue comme un essai clinique de sécurité ouvert de phase 1/2. Lors de sa première phase, 15 patients consentants atteints de SEP sont inclus.

Critère d'intégration:

Les patients consentants remplissaient les 4 critères d'inclusion suivants pour cette étude :

1. les critères cliniques de Poser et al pour la SEP définitive ;
2. hommes et femmes non enceintes âgés de 25 à 65 ans ;
3. durée de la maladie supérieure à 5 ans ; et
4. l'absence de réponse aux agents actuellement disponibles et enregistrés pour la SEP (c'est-à-dire les interférons, l'acétate de glatiramère [Copaxone] et les immunosuppresseurs), se manifestant par une augmentation d'au moins 1 degré du score EDSS au cours de l'année écoulée ou l'apparition d'au moins 2 poussées majeures de SEP au cours de la même période.

Critère d'exclusion:

1. les patients qui ont été traités avec des médicaments cytotoxiques (c.-à-d., cyclophosphamide, mitoxantrone et azathioprine) au cours des 3 mois précédant l'essai ;
2. les patients présentant une insuffisance cardiaque, rénale ou hépatique importante ou toute autre maladie pouvant interférer avec la capacité d'interpréter les résultats de l'étude ;
3. patients avec une infection active; et
4. patients présentant un déclin cognitif sévère ou incapables de comprendre et de signer le consentement éclairé.

La ponction médullaire est réalisée sous anesthésie générale courte avec ponction de la crête iliaque postéro-supérieure alors que le patient est allongé en décubitus latéral gauche ou droit. Environ 200 ml d'inoculum de moelle osseuse sont obtenus de chaque patient.

Préparation et culture de MSC Une culture de MSC purifiées est préparée dans des conditions aseptiques (salles blanches à pression positive) en utilisant un milieu Eagle filtré et stérilisé modifié par Dulbecco avec de faibles taux de glucose (Qiagen, Valencia, Californie) additionné de 10 % de sérum bovin fœtal, 1 % L-glutamine et solution à 1 % de pénicilline-streptomycin-nystatine (tous de Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Israël).

Les cellules mésenchymateuses sont cultivées pendant 40 à 60 jours, jusqu'à ce qu'elles atteignent la confluence, puis récoltées et cryoconservées dans un milieu contenant 10% de diméthylsulfoxyde dans de l'azote liquide (-196°C). A 2 semaines, un échantillon est prélevé pour test de stérilité et contrôle qualité. Une fois la stérilité confirmée, les MSC sont transférées au laboratoire sur de la neige carbonique, décongelées dans un bain-marie à 37 ° C et lavées deux fois avec une solution saline normale pour éliminer tout diméthylsulfoxyde résiduel. Les cellules sont ensuite remises en suspension dans une solution saline normale à une concentration de 10x106/mL à 15x106/mL. Deux tiers du nombre total de cellules (généralement 60x106 à 100x106) sont injectés par voie intrathécale et un tiers par voie intraveineuse. Un échantillon des cellules à injecter est testé par analyse par trieur de cellules activées par fluorescence (FACS) ; les cellules (98 %) doivent exprimer les marqueurs de surface caractéristiques des MSC (CD29, CD73, CD90, CD105 et CD166) et être négatifs pour CD34, CD45 et CD14.

Protocole de traitement Tous les patients reçoivent une injection intrathécale via une ponction lombaire standard (moyenne de 1 million de cellules par kg de poids corporel) et une injection intraveineuse de 0,3 à 1 million de cellules par kg, par voie intraveineuse.

Une phase d'extension est prévue pour les patients terminant la première phase de cet essai sous la forme d'une étude prospective ouverte avec des injections intrathécales ou intraveineuses répétées de CSM autologues chez les patients de l'essai initial et 10 autres (total jusqu'à 24 patients) atteints de formes progressives de SEP (progressive secondaire, progressive primaire ou progressive récurrente). Les patients doivent être définis comme des échecs aux traitements immunomodulateurs de première et deuxième lignes ayant connu une détérioration (au moins 0,5 degré sur l'échelle EDSS) au cours de l'année précédant leur inclusion dans notre étude ou ayant eu au moins une rechute majeure sans récupération suffisante. Les patients seront traités avec 1x10 millions de MSC par kg de poids corporel, par voie intrathécale et intraveineuse, puis avec jusqu'à 8 cycles d'injections IT ou IV de MSC (à la même dose), à ​​des intervalles de 6 à 12 mois. La durée de l'essai est de 4 ans.

Les patients seront suivis tous les 3 mois pendant toute la durée de l'essai, pour l'évaluation de la sécurité et l'évolution des scores d'invalidité (EDSS).

L'analyse immunologique sera effectuée à 4 moments (jour 1, mois 1, mois 3 et mois 6) après le premier traitement MSC et comprendra une analyse par trieur de cellules fluorescentes (FACS) pour évaluer les proportions de lymphocytes exprimant des marqueurs de l'immunité. activation ou de phénotype cellulaire régulateur.