Mesenchymale Stammzellen zur Behandlung von MS

Diese Studie ist als offene klinische Phase-1/2-Sicherheitsstudie konzipiert. In der ersten Phase werden 15 zustimmende Patienten mit MS eingeschlossen.

Einschlusskriterien:

Einwilligende Patienten erfüllten die folgenden 4 Einschlusskriterien für diese Studie:

1. die klinischen Kriterien von Poser et al. für definitive MS;
2. Männer und nicht schwangere Frauen im Alter von 25 bis 65 Jahren;
3. Krankheitsdauer länger als 5 Jahre; Und
4. Nichtansprechen auf die derzeit erhältlichen und zugelassenen Wirkstoffe für MS (d. h. Interferone, Glatirameracetat [Copaxon] und Immunsuppressoren), was sich in einem Anstieg des EDSS-Scores um mindestens 1 Grad während des vergangenen Jahres oder des Auftretens manifestiert von mindestens 2 schweren MS-Schüben im selben Zeitraum.

Ausschlusskriterien:

1. Patienten, die in den 3 Monaten vor der Studie mit zytotoxischen Medikamenten (dh Cyclophosphamid, Mitoxantron und Azathioprin) behandelt wurden;
2. Patienten mit signifikantem Herz-, Nieren- oder Leberversagen oder anderen Erkrankungen, die die Interpretation der Studienergebnisse beeinträchtigen könnten;
3. Patienten mit einer aktiven Infektion; Und
4. Patienten, die einen schweren kognitiven Rückgang zeigten oder die Einverständniserklärung nicht verstehen und unterschreiben konnten.

Die Knochenmarkpunktion wird unter kurzer Vollnarkose mit Punktion vom hinteren oberen Beckenkamm in Links- oder Rechtsseitenlage des Patienten durchgeführt. Von jedem Patienten werden etwa 200 ml Knochenmark-Inokula entnommen.

MSC-Präparation und -Kultur Eine Kultur von gereinigten MSCs wird unter aseptischen Bedingungen (mit Überdruck beaufschlagte Reinräume) unter Verwendung von filtriertem, sterilisiertem Dulbecco-modifiziertem Eagle-Medium mit niedrigem Glucosespiegel (Qiagen, Valencia, Kalifornien), ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum, 1 %, hergestellt. L-Glutamin und 1% Penicillin-Streptomycin-Nystatin-Lösung (alle von Biological Industries, Kibbuz Beit-Haemek, Israel).

Mesenchymzellen werden für 40 bis 60 Tage kultiviert, bis sie Konfluenz erreichen, und dann geerntet und in 10 % Dimethylsulfoxid enthaltendem Medium in flüssigem Stickstoff (–196°C) kryokonserviert. Nach 2 Wochen wird eine Probe zur Sterilitätsprüfung und Qualitätskontrolle entnommen. Nachdem die Sterilität bestätigt wurde, werden die MSCs auf Trockeneis ins Labor gebracht, in einem Wasserbad von 37 °C aufgetaut und zweimal mit normaler Kochsalzlösung gewaschen, um restliches Dimethylsulfoxid zu entfernen. Die Zellen werden dann in normaler Kochsalzlösung bei einer Konzentration von 10 x 106/ml bis 15 x 106/ml resuspendiert. Zwei Drittel der Gesamtzahl der Zellen (normalerweise 60 x 106 bis 100 x 106) werden intrathekal und ein Drittel intravenös injiziert. Eine Probe der zu injizierenden Zellen wird durch Analyse mit fluoreszenzaktiviertem Zellsortierer (FACS) getestet; Zellen (98 %) sollten die für MSCs charakteristischen Oberflächenmarker (CD29, CD73, CD90, CD105 und CD166) exprimieren und für CD34, CD45 und CD14 negativ sein.

Behandlungsprotokoll Alle Patienten erhalten eine intrathekale Injektion über eine standardmäßige Lumbalpunktion (durchschnittlich 1 Million Zellen pro kg Körpergewicht) und eine intravenöse Injektion von 0,3–1 Million Zellen pro kg intravenös.

Eine Verlängerungsphase ist für Patienten geplant, die die erste Phase dieser Studie als offene prospektive Studie mit wiederholten intrathekalen oder intravenösen Injektionen von autologem MSC bei Patienten aus der ursprünglichen Studie und 10 weiteren (insgesamt bis zu 24 Patienten) mit progressiven Formen von MS abschließen (sekundär progressiv, primär progressiv oder rezidivierend-progressiv). Patienten sollten definiert werden als Versagen der ersten und zweiten Linie der immunmodulatorischen Behandlung, die im Jahr vor ihrer Aufnahme in unsere Studie eine Verschlechterung (mindestens 0,5 Grad auf der EDSS-Skala) erfuhren oder mindestens einen schweren Rückfall ohne ausreichende Genesung hatten. Die Patienten werden mit 1 x 10 Millionen MSC pro kg Körpergewicht intrathekal und intravenös und anschließend mit bis zu 8 IT- oder IV-Injektionen von MSC (in derselben Dosis) in Abständen von 6-12 Monaten behandelt. Die Versuchsdauer beträgt 4 Jahre.

Die Patienten werden während der gesamten Dauer der Studie alle 3 Monate nachbeobachtet, um eine Sicherheitsbewertung und Änderungen der Behinderungswerte (EDSS) durchzuführen.

Die immunologische Analyse wird zu 4 Zeitpunkten (Tag 1, Monat 1, Monat 3 und Monat 6) nach der ersten MSC-Behandlung durchgeführt und umfasst eine fluoreszierende Zellsortierungsanalyse (FACS), um die Anteile der Lymphozyten zu bewerten, die Immunmarker exprimieren Aktivierung oder des regulatorischen Zellphänotyps.