Мезенхимальные стволовые клетки для лечения рассеянного склероза

Это исследование разработано как открытое клиническое испытание фазы 1/2. На первом этапе включены 15 добровольных пациентов с РС.

Критерии включения:

Давшие согласие пациенты соответствовали следующим 4 критериям включения в это исследование:

1. клинические критерии Poser et al. для определенного рассеянного склероза;
2. мужчины и небеременные женщины в возрасте от 25 до 65 лет;
3. длительность заболевания более 5 лет; и
4. отсутствие ответа на имеющиеся в настоящее время и зарегистрированные средства от РС (т.е. интерфероны, глатирамера ацетат [копаксон] и иммуносупрессоры), что проявляется повышением как минимум на 1 балл по шкале EDSS в течение последнего года или появлением не менее 2 крупных рецидивов рассеянного склероза за тот же период.

Критерий исключения:

1. пациенты, которых лечили цитотоксическими препаратами (например, циклофосфамидом, митоксантроном и азатиоприном) в течение 3 месяцев до исследования;
2. пациенты со значительной сердечной, почечной или печеночной недостаточностью или любым другим заболеванием, которое может помешать интерпретации результатов исследования;
3. пациенты с активной инфекцией; и
4. пациенты, у которых наблюдалось серьезное снижение когнитивных функций или которые не могли понять и подписать информированное согласие.

Аспирацию костного мозга выполняют под кратковременной общей анестезией с пункцией из задне-верхнего гребня подвздошной кости в положении больного лежа на левом или правом боку. Приблизительно 200 мл инокулята костного мозга получают от каждого пациента.

Приготовление и культивирование МСК Культуру очищенных МСК готовят в асептических условиях (чистые помещения с положительным давлением) с использованием фильтрованной стерилизованной среды Игла, модифицированной Дульбекко, с низким уровнем глюкозы (Qiagen, Валенсия, Калифорния) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% L-глутамин и 1% раствор пенициллина-стрептомицина-нистатина (все от Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Израиль).

Мезенхимальные клетки культивируют в течение 40-60 дней, пока они не достигнут слияния, а затем собирают и криоконсервируют в среде, содержащей 10% диметилсульфоксид, в жидком азоте (-196°С). Через 2 недели берется образец для проверки на стерильность и контроля качества. После подтверждения стерильности МСК переносят в лабораторию на сухом льду, оттаивают на водяной бане при 37°С и дважды промывают нормальным физиологическим раствором для удаления любого остаточного диметилсульфоксида. Затем клетки ресуспендируют в физиологическом растворе в концентрации от 10×106/мл до 15×106/мл. Две трети общего количества клеток (обычно от 60х106 до 100х106) вводят интратекально, а одну треть - внутривенно. Образец клеток для инъекции тестируют с помощью анализа с помощью флуоресцентно-активируемого сортировщика клеток (FACS); клетки (98%) должны экспрессировать поверхностные маркеры, характерные для МСК (CD29, CD73, CD90, CD105 и CD166), и быть отрицательными по CD34, CD45 и CD14.

Протокол лечения Все пациенты получают интратекальную инъекцию посредством стандартной люмбальной пункции (в среднем 1 миллион клеток на кг массы тела) и внутривенную инъекцию 0,3-1 миллиона клеток на кг, внутривенно.

Для пациентов, завершающих первую фазу данного исследования, запланирована дополнительная фаза в виде открытого проспективного исследования с повторными интратекальными или внутривенными инъекциями аутологичных МСК пациентам из исходного исследования и 10 дополнительным (всего до 24 пациентов) с прогрессирующими формами РС. (вторично-прогрессирующая, первично-прогрессирующая или рецидивирующе-прогрессирующая). Пациенты должны быть определены как пациенты с неудачей первой и второй линии иммуномодулирующей терапии, у которых наблюдалось ухудшение (не менее 0,5 степени по шкале EDSS) в течение года, предшествующего их включению в наше исследование, или у которых был хотя бы один серьезный рецидив без достаточного восстановления. Пациентов будут лечить 1x10 миллионов МСК на кг массы тела, интратекально и внутривенно, а затем до 8 курсов ИТ- или ВВ-инъекций МСК (в той же дозе) с интервалами 6-12 месяцев. Продолжительность судебного разбирательства – 4 года.

Пациенты будут наблюдаться каждые 3 месяца на протяжении всего исследования для оценки безопасности и изменения показателей инвалидности (EDSS).

Иммунологический анализ будет проводиться в 4 временных точках (день 1, месяц 1, месяц 3 и месяц 6) после первой обработки МСК и будет включать анализ флуоресцентного сортировщика клеток (FACS) для оценки доли лимфоцитов, экспрессирующих маркеры иммунного ответа. активации или регуляторного клеточного фенотипа.