Validace metody pro vyhledávání reziduální choroby v autokryokonzervovaných ovariálních tkáních (VMRDO)

Kryokonzervace ovariální tkáně je nabízena mladým dívkám a ženám do 35 let, které musí podstoupit sterilizační gonadotoxickou léčbu s cílem zachovat jejich plodnost. Hlavní část vaječníku je zachována, protože primordiální a primární folikuly jsou odolné vůči protokolům zmrazování / rozmrazování. Při absenci jiných technik (in vivo zrání, injekce izolovaných ovariálních folikulů atd.) je autoštěpování této kryokonzervované tkáně v současnosti jedinou technikou umožňující obnovení plodnosti. Autoštěp je možný pouze v případě, že indikací ke kryoprezervaci vaječníků je nenádorová patologie nebo maligní patologie s nízkým rizikem ovariálních metastáz. V jiných případech neoplastických patologií, zejména v případech akutní leukémie, nelze tkáň zatím znovu použít kvůli nedostatku jakékoli kodifikované techniky pro hodnocení reziduální choroby (MRD). Tým již dva roky vyvíjí a ověřuje techniku ​​hledání reziduálního onemocnění ve fragmentech ovariální kůry v případech akutní leukémie. Tato technika je založena na originálním protokolu pro disociaci ovariální tkáně za účelem získání populace izolovaných ovariálních buněk, které mohou být analyzovány vícebarevnou průtokovou cytometrií. Specifičnost a citlivost techniky byla prokázána na experimentálním modelu. Tento model spočívá v použití 8barevné průtokové cytometrie k hledání charakterizovatelných leukemických buněk přidaných v různých ředěních k populaci izolovaných ovariálních buněk odebraných z modelového ovariálního kortexu až do ředění 10-5. Když byly molekulární markery přítomny při diagnóze, byly nalezeny kvantitativní polymerázovou řetězovou reakcí v reálném čase (RQ-PCR) se stejnými ředěními. Modelová tkáň pocházela z laparoskopického ovariálního vrtání u pacientek se syndromem polycystických ovarií. Hlavním cílem tohoto projektu je ověřit techniky, které byly dříve kodifikovány s různými populacemi leukemických buněk, které lze charakterizovat. Výzkumníci se pak zaměří na adaptaci a validaci této techniky pro hledání MRD pomocí 8barevné průtokové cytometrie na kryokonzervovaných fragmentech ovariální kůry od pacientek s leukémií, které jsou ohroženy metastázami. Sekundárním cílem bude implementace postupů pro onkologickou kvalifikaci štěpů v případech maligní patologie a zvážení doporučení pro použití této kryokonzervované ovariální tkáně prostřednictvím techniky autoštěpu pro tyto indikace.