Convalida di un metodo per la ricerca della malattia residua nei tessuti ovarici autocriopreservati (VMRDO)

La crioconservazione del tessuto ovarico viene offerta a ragazze e donne di età inferiore ai 35 anni che devono sottoporsi a trattamento gonadotossico sterilizzante, con l'obiettivo di preservarne la fertilità. La parte principale dell'ovaio è preservata, poiché i follicoli primordiali e primari sono resistenti ai protocolli di congelamento/scongelamento. In assenza di altre tecniche (maturazione in vivo, iniezione di follicoli ovarici isolati, ecc.), l'autotrapianto di questo tessuto crioconservato è attualmente l'unica tecnica che consente di ripristinare la fertilità. L'autotrapianto è possibile solo se l'indicazione alla crioconservazione ovarica è una patologia non neoplastica o una patologia maligna a basso rischio di metastasi ovariche. In altri casi di patologie neoplastiche, in particolare nei casi di leucemia acuta, il tessuto non è ancora riutilizzabile per la mancanza di una tecnica codificata per la valutazione della malattia residua (MRD). Il team ha sviluppato e convalidato per due anni una tecnica per cercare la malattia residua in frammenti di corteccia ovarica nei casi di leucemia acuta. Questa tecnica si basa su un protocollo originale per la dissociazione del tessuto ovarico per ottenere una popolazione di cellule ovariche isolate che possono essere analizzate mediante citometria a flusso multicolore. La specificità e la sensibilità della tecnica sono state dimostrate in un modello sperimentale. Questo modello consiste nell'utilizzare la citometria a flusso a 8 colori per cercare cellule leucemiche caratterizzabili aggiunte in diverse diluizioni a una popolazione di cellule ovariche isolate prelevate dalla corteccia ovarica modello e fino a una diluizione di 10-5. Quando i marcatori molecolari erano presenti alla diagnosi, sono stati trovati mediante reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale (RQ-PCR) con le stesse diluizioni. Il tessuto modello proveniva dalla perforazione ovarica laparoscopica in pazienti con sindrome dell'ovaio policistico. L'obiettivo principale di questo progetto è quello di convalidare le tecniche che sono state precedentemente codificate con diverse popolazioni di cellule leucemiche che possono essere caratterizzate. Gli investigatori mirano quindi ad adattare e convalidare questa tecnica per cercare MRD utilizzando la citometria a flusso a 8 colori su frammenti crioconservati di corteccia ovarica da pazienti affetti da leucemia che sono a rischio di metastasi. Obiettivi secondari saranno implementare procedure per la qualificazione oncologica degli innesti in caso di patologia maligna e considerare le raccomandazioni per l'utilizzo di questo tessuto ovarico criopreservato attraverso la tecnica dell'autotrapianto per queste indicazioni.