Validierung einer Methode zur Suche nach Resterkrankungen in autokryokonserviertem Ovarialgewebe (VMRDO)

Die Kryokonservierung von Ovarialgewebe wird jungen Mädchen und Frauen unter 35 Jahren angeboten, die sich einer sterilisierenden gonadotoxischen Behandlung unterziehen müssen, um die Fruchtbarkeit zu erhalten. Der Hauptteil des Eierstocks bleibt erhalten, da Primordial- und Primärfollikel resistent gegen Einfrier-/Auftauprotokolle sind. In Ermangelung anderer Techniken (In-vivo-Reifung, Injektion isolierter Ovarialfollikel usw.) ist die Autotransplantation dieses kryokonservierten Gewebes derzeit die einzige Technik, mit der die Fertilität wiederhergestellt werden kann. Eine Autotransplantation ist nur möglich, wenn die Indikation für die Kryokonservierung der Eierstöcke eine nicht-neoplastische Pathologie oder eine maligne Pathologie mit einem geringen Risiko für Ovarialmetastasen ist. In anderen Fällen neoplastischer Pathologien, insbesondere bei akuter Leukämie, kann Gewebe aufgrund des Fehlens einer kodifizierten Methode zur Bewertung der Resterkrankung (MRD) noch nicht wiederverwendet werden. Das Team entwickelt und validiert seit zwei Jahren eine Technik, um bei akuter Leukämie nach Resterkrankungen in Fragmenten der Eierstockrinde zu suchen. Diese Technik basiert auf einem Originalprotokoll zum Dissoziieren von Eierstockgewebe, um eine Population isolierter Eierstockzellen zu erhalten, die durch Mehrfarben-Durchflusszytometrie analysiert werden kann. Die Spezifität und Sensitivität der Technik wurden in einem Versuchsmodell demonstriert. Dieses Modell besteht darin, 8-Farben-Durchflusszytometrie zu verwenden, um nach charakterisierbaren Leukämiezellen zu suchen, die in unterschiedlichen Verdünnungen zu einer Population von isolierten Ovarialzellen hinzugefügt wurden, die aus dem Ovarialkortex des Modells entnommen wurden, und zwar bis zu einer Verdünnung von 10-5. Wenn die molekularen Marker bei der Diagnose vorhanden waren, wurden sie durch die quantitative Polymerase-Kettenreaktion in Echtzeit (RQ-PCR) mit denselben Verdünnungen gefunden. Das Modellgewebe stammte aus der laparoskopischen Ovarialbohrung bei Patientinnen mit polyzystischem Ovarialsyndrom. Das Hauptziel dieses Projekts ist die Validierung von Techniken, die zuvor mit verschiedenen Populationen von Leukämiezellen, die charakterisiert werden können, kodifiziert wurden. Die Forscher zielen dann darauf ab, diese Technik anzupassen und zu validieren, um mithilfe der 8-Farben-Durchflusszytometrie an kryokonservierten Fragmenten der Ovarialrinde von Leukämiepatienten, bei denen ein Metastasierungsrisiko besteht, nach MRD zu suchen. Sekundäre Ziele werden sein, Verfahren zur onkologischen Qualifizierung von Transplantaten bei malignen Pathologien zu implementieren und die Empfehlungen für die Verwendung dieses kryokonservierten Ovarialgewebes durch die Autograft-Technik für diese Indikationen zu berücksichtigen.