Netrin 1 a jeho receptor Unc5b jako markery onemocnění parodontu

Do studie bylo zapojeno celkem 60 jedinců, zahrnujících 20 pacientů s parodontitidou (skupina P), 20 pacientů s gingivitidou (skupina G) a 20 periodontálně zdravých kontrol (skupina H). Pacienti byli diagnostikováni podle nového klasifikačního schématu. Bylo také stanoveno stadium a rozsah parodontitidy.

Klinická periodontální kritéria pro diagnostiku skupin byla následující: skupina s parodontitidou měla ztrátu mezizubního úponu (CAL) ≥ 5 mm v místě největší ztráty a hloubku periodontálního sondování (PD) ≥ 6 mm na jednom nebo více místech 2 nesousedící zuby alespoň ve dvou kvadrantech úst. V souladu s tím byli do studie zahrnuti pacienti s generalizovanou parodontitidou stadia III. Pacienti byli diagnostikováni jako gingivitida s krvácením při sondáži ≥ 50 %, PD ≤ 3 mm a bez radiografického úbytku kostní hmoty nebo CAL. Periodontálně zdraví jedinci neměli v anamnéze zaznamenané problémy s parodontem, s PD ≤3 mm, bez radiografického úbytku kostní hmoty, s dobrou ústní hygienou, bez zánětu dásní.

Kritéria pro zařazení byla následující: (1) věk >18 let, (2) mít alespoň 16 přirozených zubů (kromě třetího moláru), (3) nekuřáci bez anamnézy kouření, (4) bez diagnostikovaného onemocnění nebo drog příjem, který by mohl ovlivnit stav parodontu. Pacienti, kteří během posledních 3 měsíců (1) užívali antibiotika, nesteroidní protizánětlivé nebo jiné léky, (2) podstoupili nechirurgickou nebo chirurgickou parodontální léčbu, (3) požadavek na restorativní a endodontickou terapii, (4) snímatelnou částečnou zubní protézu a /nebo s ortodontickou léčbou byli ze studie vyloučeni. Současné těhotenství nebo kojení a sérový C reaktivní protein (CRP) > 3 mg/l byly rovněž vylučovacími kritérii.

Všichni jedinci byli vyšetřeni na začátku a čtyři týdny po nechirurgickém parodontologickém ošetření včetně hloubky sondování celých úst (PD), CAL, přítomnosti krvácení při sondování (BOP), indexu papilárního krvácení (PBI), indexu dásní (GI) a plaku index (PI) kromě třetích molárů. PD a CAL byly měřeny na šesti místech na zub pomocí manuální periodontální sondy.

Nechirurgická parodontologická léčba u skupiny s parodontitidou zahrnovala supra- a subgingivální škálování, hoblování kořenů a pokyny pro ústní hygienu. Subgingivální škálování a hoblování kořenů bylo provedeno v lokální anestezii ve dvou sezeních během 48-72 hodin. Skupina s gingivitidou měla pokyny pro supra- a subgingivální škálování, leštění a ústní hygienu. Léčbu pacientů s gingivitidou a parodontózou prováděl parodontolog (BM) pomocí ručních a ultrazvukových nástrojů. Všechna měření byla provedena stejným kalibrovaným examinátorem (SG).

Odběr slin

Byly odebrány celé nestimulované vzorky slin. Každý účastník byl požádán, aby si ústa nejprve zcela vyplachoval vodou z vodovodu po dobu 1 minuty, počkal 10 minut a poté vykašlal do sterilní polypropylenové zkumavky po dobu 5 minut.

Odběr vzorků gingivální krevikulární tekutiny (GCF).

Vzorky GCF byly získány ze dvou nesousedících interproximálních míst v jednom zubu s jednoduchým kořenem a jednom zubu s více kořeny pomocí standardizovaných proužků filtračního papíru. GCF byl odebrán ze dvou míst s GI < 1, PD ≤ 3 mm a bez BOP ve zdravé skupině; dvě místa s GI ≥ 2, PD ≤ 3 mm a pozitivní BOP (viditelné známky zánětu) ve skupině s gingivitidou; a dvě nejhlubší kapsy (≥ 5 mm) s GI ≥ 2 a pozitivním BOP ve skupině s parodontitidou.

Odběr vzorků séra

Vzorky séra byly odebrány po odběru slin a GCF před periodontálním ošetřením. Šest mililitrů žilní krve bylo získáno standardní metodou venepunkce a sérum bylo odděleno od krve centrifugací při 1500 g po dobu 20 minut.

Měření hladin Netrinu 1 a Unc5b ve vzorcích GCF, slin a séra

Hladiny Netrin 1 a Unc5b ve vzorcích GCF, slin a séra byly měřeny enzymatickou imunoanalýzou (ELISA) za použití komerčních souprav podle pokynů výrobce.

Statistická analýza

Všechny analýzy dat byly provedeny pomocí statistického softwarového balíku. Porovnání klinických a biochemických parametrů mezi studijními skupinami bylo provedeno pomocí Kruskal-Wallisova s ​​Mann Whitney U testu s Bonferroniho korekční metodou. Vnitroskupinová srovnání (na začátku a v prvním měsíci) byla provedena pomocí Wilcoxonova testu pro párové vzorky. Asociace mezi hladinami GCF, biomarkerů ve slinách a séru a klinickými parametry byly také zkoumány pomocí Spearmanovy korelační analýzy.