Netrin 1 e seu receptor Unc5b como marcadores de doença periodontal

Um total de 60 indivíduos, incluindo 20 pacientes com Periodontite (Grupo P), 20 pacientes com gengivite (Grupo G) e 20 controles periodontais saudáveis ​​(Grupo H) foram envolvidos no estudo. Os pacientes foram diagnosticados de acordo com o novo esquema de classificação. O estágio e a extensão da periodontite também foram determinados.

Os critérios clínicos periodontais para o diagnóstico dos grupos foram os seguintes: o grupo periodontite apresentou perda de inserção clínica interdental (CAL) ≥5 mm no local de maior perda e profundidade de sondagem periodontal (PD) ≥ 6 mm em um ou mais locais do 2 dentes não adjacentes em pelo menos dois quadrantes da boca. Assim, os pacientes com periodontite generalizada em estágio III foram incluídos no estudo. Os pacientes foram diagnosticados como gengivite com sangramento à sondagem ≥ 50%, PD ≤3 mm e sem perda óssea radiográfica ou CAL. Indivíduos periodontalmente saudáveis ​​não tinham história registrada de problemas periodontais, com DP ≤3 mm, sem perda óssea radiográfica, boa higiene oral, sem inflamação gengival.

Os critérios de inclusão foram os seguintes: (1) com mais de 18 anos, (2) com pelo menos 16 dentes naturais (excluindo o terceiro molar), (3) não fumantes sem história de tabagismo, (4) sem nenhuma doença médica diagnosticada ou uso de drogas ingestão que pode afetar a condição periodontal. Os pacientes que (1) tomaram antibióticos, antiinflamatórios não esteróides ou quaisquer outras drogas nos últimos 3 meses, (2) receberam tratamento periodontal não cirúrgico ou cirúrgico, (3) necessidade de terapia restauradora e endodôntica, (4) prótese parcial removível e /ou em tratamento ortodôntico foram excluídos do estudo. Gravidez ou lactação atual e presença de proteína C reativa (PCR) sérica > 3mg/L também foram critérios de exclusão.

Todos os indivíduos foram examinados no início e quatro semanas após o tratamento periodontal não cirúrgico, incluindo profundidade de sondagem de toda a boca (PD), CAL, presença de sangramento à sondagem (BOP), índice de sangramento papilar (PBI), índice gengival (GI) e placa índice (PI) exceto os terceiros molares. PD e CAL foram medidos em seis locais por dente usando uma sonda periodontal manual.

O tratamento periodontal não cirúrgico para o grupo de periodontite incluiu raspagem supra e subgengival, alisamento radicular e instruções de higiene oral. Raspagem subgengival e alisamento radicular foram realizados sob anestesia local em duas sessões dentro de 48-72 h. O grupo gengivite teve raspagem supra e subgengival, polimento e instruções de higiene oral. O tratamento de pacientes com gengivite e periodontite foi realizado por um periodontista (BM) usando instrumentos manuais e ultrassônicos. Todas as medidas foram realizadas pelo mesmo examinador calibrado (SG).

Amostragem de saliva

Amostras inteiras de saliva não estimulada foram coletadas. Cada participante foi solicitado primeiro a enxaguar a boca completamente com água da torneira por 1 minuto, aguardar 10 minutos e depois expectorar em tubo de polipropileno estéril por 5 minutos.

Amostragem de fluido crevicular gengival (GCF)

Amostras GCF foram obtidas de dois sítios interproximais não adjacentes em um dente unirradicular e outro multi-radicular por meio de tiras de papel de filtro padronizadas. GCF foi amostrado de dois locais com GI < 1, PD ≤ 3 mm e sem BOP no grupo saudável; dois locais com IG ≥ 2, PD ≤ 3 mm e BOP positivo (sinais visíveis de inflamação) no grupo gengivite; e duas bolsas mais profundas (≥ 5 mm) com IG ≥ 2 e BOP positivo no grupo periodontite.

Amostragem de soro

Amostras de soro foram coletadas após amostragem de saliva e GCF antes do tratamento periodontal. Seis mililitros de sangue venoso foram obtidos pelo método padrão de punção venosa e o soro foi separado do sangue por centrifugação a 1.500 g por 20 minutos.

Medição dos níveis de Netrin 1 e Unc5b em GCF, Saliva e Amostras de Soro

Os níveis de Netrina 1 e Unc5b em amostras de GCF, saliva e soro foram medidos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) usando kits comerciais de acordo com as diretrizes do fabricante.

Análise estatística

Todas as análises de dados foram realizadas usando um pacote de software estatístico. As comparações dos parâmetros clínicos e bioquímicos entre os grupos de estudo foram realizadas por meio do teste de Kruskal-Wallis com Mann Whitney U com correção de Bonferroni. As comparações intragrupo (no início e no primeiro mês) foram realizadas usando o teste de Wilcoxon para amostras pareadas. As associações entre os níveis de GCF, saliva e biomarcadores séricos e parâmetros clínicos também foram examinadas usando a análise de correlação de classificação de Spearman.