Netrin 1 e il suo recettore Unc5b come marcatori della malattia parodontale

Nello studio sono stati coinvolti un totale di 60 individui, di cui 20 pazienti con parodontite (Gruppo P), 20 pazienti con gengivite (Gruppo G) e 20 controlli parodontalmente sani (Gruppo H). I pazienti sono stati diagnosticati secondo il nuovo schema di classificazione. Sono stati anche determinati lo stadio e l'estensione della parodontite.

I criteri clinici parodontali per la diagnosi dei gruppi erano i seguenti: il gruppo parodontale presentava perdita di attacco clinico interdentale (CAL) ≥5 mm nel sito di maggiore perdita e profondità di sondaggio parodontale (PD) ≥ 6 mm in uno o più siti del 2 denti non adiacenti in almeno due quadranti della bocca. Di conseguenza, i pazienti con parodontite generalizzata in stadio III sono stati inclusi nello studio. Ai pazienti è stata diagnosticata una gengivite con sanguinamento al sondaggio ≥ 50%, PD ≤3 mm e nessuna perdita ossea radiografica o CAL. Gli individui parodontalmente sani non avevano una storia registrata di problemi parodontali, con PD ≤3 mm, nessuna perdita ossea radiografica, buona igiene orale, nessuna infiammazione gengivale.

I criteri di inclusione erano i seguenti: (1) di età >18 anni, (2) con almeno 16 denti naturali (escluso il terzo molare), (3) non fumatori senza storia di fumo, (4) senza alcuna malattia medica diagnosticata o droga assunzione che potrebbe influenzare la condizione parodontale. I pazienti che avevano (1) assunto antibiotici, antinfiammatori non steroidei o altri farmaci negli ultimi 3 mesi, (2) hanno ricevuto un trattamento parodontale non chirurgico o chirurgico, (3) una terapia riparativa ed endodontica necessaria, (4) una protesi parziale rimovibile e /o sottoposti a terapia ortodontica sono stati esclusi dallo studio. Anche la gravidanza o l'allattamento in corso e la presenza di proteina C reattiva (PCR) sierica > 3 mg/L erano i criteri di esclusione.

Tutti gli individui sono stati esaminati al basale e quattro settimane dopo il trattamento parodontale non chirurgico, inclusi profondità di sondaggio dell'intera bocca (PD), CAL, presenza di sanguinamento al sondaggio (BOP), indice di sanguinamento papillare (PBI), indice gengivale (GI) e placca indice (PI) tranne i terzi molari. PD e CAL sono stati misurati in sei siti per dente utilizzando una sonda parodontale manuale.

Il trattamento parodontale non chirurgico per il gruppo della parodontite comprendeva il ridimensionamento sopra e sottogengivale, la levigatura radicolare e le istruzioni per l'igiene orale. Il ridimensionamento sottogengivale e la levigatura radicolare sono stati eseguiti in anestesia locale in due sessioni entro 48-72 ore. Il gruppo gengivite aveva istruzioni per il ridimensionamento, la lucidatura e l'igiene orale sopra e sottogengivale. Il trattamento dei pazienti con gengivite e parodontite è stato eseguito da un parodontologo (BM) utilizzando strumenti manuali e ad ultrasuoni. Tutte le misurazioni sono state eseguite dallo stesso esaminatore calibrato (SG).

Campionamento della saliva

Sono stati raccolti interi campioni di saliva non stimolati. Ad ogni partecipante è stato chiesto prima di sciacquare completamente la bocca con acqua di rubinetto per 1 minuto, attendere 10 minuti, quindi espettorare in un tubo di polipropilene sterile per 5 minuti.

Prelievo di fluido crevicolare gengivale (GCF).

I campioni GCF sono stati ottenuti da due siti interprossimali non adiacenti in un dente a radice singola e uno a radice multipla mediante strisce di carta da filtro standardizzate. GCF è stato campionato da due siti con GI <1, PD ≤ 3 mm e senza BOP nel gruppo sano; due siti con GI ≥ 2, PD ≤ 3 mm e BOP positivo (segni visibili di infiammazione) nel gruppo gengivite; e due tasche più profonde (≥ 5 mm) con GI ≥ 2 e BOP positivo nel gruppo parodontite.

Campionamento del siero

I campioni di siero sono stati prelevati dopo il campionamento della saliva e del GCF prima del trattamento parodontale. Sono stati ottenuti sei millilitri di sangue venoso mediante un metodo standard di venipuntura e il siero è stato separato dal sangue mediante centrifugazione a 1.500 g per 20 minuti.

Misurazione dei livelli di netrina 1 e Unc5b in campioni di GCF, saliva e siero

I livelli di netrina 1 e Unc5b nei campioni di GCF, saliva e siero sono stati misurati mediante il test ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) utilizzando kit commerciali secondo le linee guida del produttore.

Analisi statistica

Tutte le analisi dei dati sono state eseguite utilizzando un pacchetto software statistico. I confronti dei parametri clinici e biochimici tra i gruppi di studio sono stati eseguiti utilizzando il test U di Kruskal-Wallis con Mann Whitney con il metodo di correzione di Bonferroni. I confronti intragruppo (al basale e al primo mese) sono stati eseguiti utilizzando il test di Wilcoxon per campioni appaiati. Le associazioni tra livelli di GCF, biomarcatori salivari e sierici e parametri clinici sono state esaminate anche utilizzando l'analisi di correlazione del rango di Spearman.