Klinický účinek extraktu z dialyzovatelných leukocytů u podezřelých nebo potvrzených případů COVID-19 (FUTURE-T) (FUTURE-T)

Dialyzable Leukocyte Extract (DLE) (Transferon oral®) je dialyzovaný extrakt získaný z lidských leukocytů. Jeho aktivní složkou je komplexní směs nízkomolekulárních peptidů získaných dialýzou (12 kDa) a následnou ultrafiltrací (10 kDa) lyžovaných koncentrátů leukocytů a krevních destiček. Tento produkt vyrábí Laboratoř vědeckého výzkumu (Pharma-FT) na Národní škole biologických věd (ENCB), Národní polytechnický institut (IPN) pomocí patentované metody v Mexiku (MX/a/2011/013852), USA (US9328152B2 ), EU (EPA-126128), Kanada (2860260), Peru (000969-2014/DIN) a Kolumbie (14138326).

DLE je komplexní léčivo, účinnou látkou je více peptidových jednotek. DLE tedy nelze plně charakterizovat, což vyžaduje použití analytických technik, které mohou popsat celkové chování všech jeho složek (peptidová polydisperzita).

Ke stanovení molekulové hmotnosti peptidových složek DLE na základě jejich migrace přes polymerní matrici byly použity dvě ortogonální techniky. Molekulová hmotnost 10 kDa byla stanovena elektroforézou na polyakrylamidových gelech za denaturačních podmínek (SDS-PAGE), zatímco molekulová hmotnost nižší než 15 kDa byla stanovena vylučovací chromatografií.

Peptidová povaha DLE byla prokázána pomocí aminogramové metody. Tato metoda zahrnuje kyselou hydrolýzu peptidových složek, dokud nejsou získány volné aminokyseliny, které jsou derivatizovány a identifikovány na základě retenčního času aminokyselinového standardu pomocí chromatografie na reverzní fázi (RP-UPLC). Kromě toho bylo zjištěno, že peptidy tohoto léčiva jsou vysoce rozpustné pomocí RP-UPLC spojené s UV, zatímco hmotnostní spektrometrie spojená s RP-UPLC vykazovala konzistentní ionizační vzory.

Neklinické a klinické studie relevantní pro tento výzkum. Experimentálně na myším modelu virové infekce podávání DLE ukázalo snížení sérových koncentrací TNF a IL-6, doprovázené zvýšením IFN. U lidí je virová etiologie zodpovědná za 90–95 % případů infekcí dýchacích cest. Běžné viry podílející se na respiračních onemocněních jsou rhinoviry (~50 %), koronaviry (~10 %), adenoviry, respirační syncytiální virus, chřipka a parainfluenza viry (které obecně tvoří 10 % až 15 %), lidský metapneumovirus (< 5 %). První důkaz, že DLE může mít terapeutický účinek u respiračních infekcí, vyplynul z analýzy série případů (36 dospělých a 63 dětí) s alergickou rýmou, kteří dostávali DLE jako doplněk ke standardní léčbě. 11 % dospělých a 25,4 % dětí uvedlo pokles frekvence respiračních infekcí. Podobně v sérii 70 dospělých a 54 dětí s perzistujícím středně těžkým astmatem, kteří dostávali léčbu DLE jako adjuvantní terapii, 44 % dospělých a 31 % dětí uvádělo kromě zlepšení alergických onemocnění snížení frekvence respiračních infekcí. příznaky. Ve studii 52 jedinců byla účinnost DLE hodnocena snížením závažnosti a frekvence infekčních symptomů. Tato studie prokázala snížení frekvence a závažnosti infekčních respiračních symptomů (77,1 %) u dětských pacientů. Pro srovnání, 82,4 % dospělých snižuje frekvenci a/nebo snižuje závažnost infekčních respiračních symptomů. V klinickém sledování pediatrických pacientů se sepsí, u kterých byl ke standardní léčbě přidán DLE, pokles hladin C-reaktivního proteinu, snížení počtu neutrofilů za 72 hodin po hospitalizaci a zvýšení míry přežití o 30 % hlášeno.

SARS-CoV-2 vyvolává významné poškození plic v důsledku nekontrolované a dysregulované zánětlivé aktivity, pak byly jako léčba navrženy imunomodulační léky. Poznatky související s DLE podporují jejich imunomodulační kapacitu jako potenciálního terapeutického nástroje u infekčních respiračních onemocnění s výraznou zánětlivou složkou.

Primární cíl. Získat informace o účinnosti DLE jako pomůcky při symptomatické léčbě snížením známek a symptomů akutní respirační infekce (podezření/potvrzené případy COVID-19).

Sekundární cíle.

1. K vyhodnocení klinického zhoršení a dat respiračního alarmu.
2. Posoudit trvání klinických projevů.
3. Prozkoumat změny cytokinů
4. Získat údaje o bezpečnosti DLE jako pomůcky při symptomatické léčbě akutní respirační infekce (podezření/potvrzené případy COVID-19).
5. Vygenerovat informace pro ověření škály nepředvídaných událostí (CS) pro posouzení závažnosti akutního respiračního onemocnění (podezření/potvrzené případy COVID-19).

Hypotéza. Přidání DLE k symptomatické léčbě sníží známky a příznaky akutní respirační infekce.

Způsob náboru bude realizován elektronicky.

Akutní respirační infekce bude klasifikována podle klinických příznaků podle Mexické klinické směrnice, ve které se onemocnění COVID-19 dělí na nezávažné a závažné případy. Klinické hodnocení pacienta bude hodnoceno CS navrženým pro tuto studii a zahrnuje tři hlavní položky rozdělené do vedlejších položek (rozsah 0 až 4 v každé z nich):

Celkové příznaky: Horečka, bolest hlavy Příznaky horních dýchacích cest: Kýchání, ucpaný nos, rýma Příznaky dýchacích cest dolních cest dýchacích: Kašel, dušnost a bolest nebo pocit sevření nebo útlaku na hrudi.

Statistika. Pro analýzu budou uvažovány čtyři populace: randomizovaní jedinci ve studii nebo úplném analytickém souboru (FAS), bezpečnostní populace (SP), populace s úmyslem léčit (ITT) a populace podle protokolu (PP).

Populace FAS se bude skládat ze všech jedinců, kteří byli randomizováni do studie (je jim přiděleno náhodné číslo). Populace ITT se bude skládat ze všech pacientů, kteří byli randomizováni, kteří dostali alespoň jednu dávku studovaného léku a kteří měli alespoň jedno hodnocení primárních nebo sekundárních cílových bodů po základním hodnocení. Podle principu záměru léčby budou pacienti analyzováni podle léčby přidělené při randomizaci. SP se bude skládat ze všech pacientů, kteří dostali alespoň jednu dávku studovaného léku a kteří mají alespoň jedno hodnocení bezpečnosti po základním hodnocení. Pacienti budou analyzováni podle léčby, kterou dostali. Jako upřesňující poznámka, prohlášení, že pacient nemá žádné nežádoucí účinky, představuje posouzení bezpečnosti. PP se bude skládat ze všech pacientů v populaci ITT, kteří dokončí všechny návštěvy, kteří mají přesné vyhodnocení proměnné primární účinnosti a kteří nevykazují významná porušení protokolu.

Statistické metody. Demografické údaje, klinická anamnéza a klíčové výchozí proměnné účinnosti pro všechny randomizované pacienty budou shrnuty podle léčené skupiny v tabulkách (počet a procento) pro kvalitativní proměnné; a v tabulkách obsahujících průměr, směrodatnou odchylku, medián, minimum a maximum podle léčené skupiny pro kvantitativní proměnné. Srovnání skupin při vstupní návštěvě bude analyzováno pomocí chí-kvadrát testů pro kvalitativní proměnné a dvouvýběrových studentských t-testů pro kvantitativní proměnné (hodnoty p budou poskytnuty pouze pro popisné účely). Kromě toho budou pomocí frekvenčních tabulek shrnuty anamnéza, souběžné léky a komorbidity.

Primární výsledek. Primárním výsledkem účinnosti bude měření skóre CS na konci léčby nebo předčasném ukončení v populaci ITT. Algoritmus imputace posledního přeneseného pozorování (LOCF) bude aplikován v případě pacientů, kteří ukončí léčbu, přeruší léčbu nebo odstoupí ze studie. Primární analýza bude provedena pomocí ITT populace. Tato analýza bude také provedena v populaci PP za účelem posouzení robustnosti výsledků. Primární výsledek bude analyzován pomocí kovariančního modelu, který zahrnuje léčenou skupinu, výchozí hodnotu a centrum.

Průzkumnou hypotézou primárního cíle je zjistit, zda by mohl existovat rozdíl ve snížení skóre CS na konci léčby podle níže popsaného přístupu založeného na hypotéze nadřazenosti:

Ho: µPlacebo - µDLE>0 Ha: µPlacebo - µDLE<0

Možná převaha přidání DLE jako pomůcky k symptomatické léčbě ve srovnání se symptomatickou/placebem bude stanovena, pokud je horní hranice 2stranného 95% intervalu spolehlivosti pro rozdíl µPlacebo-µDLE menší než 0.

Sekundární výsledky. Vzhled dat respiračního alarmu bude identifikován ve studijních skupinách a výsledky budou prezentovány v grafu četnosti s podílem pacientů, kteří předložili data alarmu, podle skupiny. Bude analyzován pomocí Chí-kvadrát testu. Trvání klinických projevů odpovídá počtu dnů s některým ze známek a symptomů popsaných v CS. V každé léčebné skupině bude provedena popisná statistika; porovnání bude provedeno pomocí studentova t-testu. Imunologické změny jsou definovány jako změny celkového počtu leukocytů, celkových lymfocytů, ESR a sérové ​​koncentrace CRP, prokalcitoninu, D-dimeru, feritinu, CK, myoglobinu, IL-6, TNF, interferonů a specifických protilátek proti viru. Popisné statistiky budou prezentovány podle léčebné skupiny vs. návštěva, stejně jako podíl pacientů, kteří vykazují normalizaci hodnot během léčby.

Velikost vzorku. Z důvodu nedostatku informací o účinnosti studovaného léku v případech akutní respirační infekce COVID-19 se statistický výpočet velikosti vzorku neuplatní. Nicméně, jako popisné cvičení, vzhledem k současné nepředvídatelné situaci pandemie COVID-19, je v této studii navržen odhad velikosti vzorku na základě CS, který byl speciálně navržen pro tuto studii. Kontingenční skóre se pohybuje od 0 do 32, vezmeme-li v úvahu, že studovanou populací jsou nezávažní pacienti, bude průměr skóre odpovídat řádu 16 bodů se směrodatnou odchylkou 4. Rovněž se předpokládalo, že chování při vyhodnocování je chování spojitá proměnná s normálním rozdělením.

Postup výpočtu velikosti vzorku je pomocí rovnice Julious 2004/FARTSSIE22 pro návrhy nadřazenosti paralelně se dvěma skupinami (DLE vs. Placebo). Podle následujících hodnot:

A. Chyba typu I: 0,05 (5 %); b. Chyba typu II: 0,2 (20 %). Síla: 1-b: 0,8 (80 %) Navrhovaná směrodatná odchylka: 4 Rozdíl k detekci mezi skupinami: 1 Vztah velikosti vzorku mezi skupinami: 1:1 (vyvážený) Vypočtená velikost vzorku je 253 na skupinu. Dalších 10 % (q) bude zahrnuto jako kompenzace vyřazení ze studie nebo léčby; proto bude 562 pacientů (nt) 281 randomizováno podle léčby, aby se získal odhadovaný počet pacientů pro test hypotézy. nt=n/l-q=506/0,9=562

Postupy pro vysvětlení chybějících údajů. Chybějící data pro proměnné, které jsou měřeny při jedné příležitosti, nelze nahradit a daného jedince nelze zahrnout do analýzy. U dat, která jsou měřena více než jednou, bude v případě chybějících dat zohledněna poslední hodnota naměřená po základní linii. (LOCF)

Postupy pro vykazování jakékoli odchylky od statistického plánu. Pokud se vyskytnou odchylky od původního statistického plánu, budou popsány a zdůvodněny v závěrečné zprávě.

Výběr osob, které budou zahrnuty do analýzy. Do analýzy budou zahrnuti všichni randomizovaní jedinci, kteří dostali alespoň jednu dávku hodnoceného produktu pod maximem ITT.

Přístup k informacím. Studie bude sledována konkrétním personálem; budou umožněny a usnadněny interní a externí inspekce a audity, které umožní přístup k informacím při zachování důvěrnosti jednotlivců studie.