Effetto clinico dell'estratto di leucociti dializzabili in casi sospetti o confermati di COVID-19 (FUTURE-T) (FUTURE-T)

L'estratto di leucociti dializzabili (DLE) (Transferon oral®) è un estratto dializzato ottenuto da leucociti umani. Il suo principio attivo è una miscela complessa di peptidi a basso peso molecolare ottenuti dalla dialisi (12 kDa) e successiva ultrafiltrazione (10 kDa) di concentrati leucocitari e piastrinici lisati. Questo prodotto è prodotto dal Laboratory of Scientific Research (Pharma-FT) presso la Nacional School of Biological Sciences (ENCB), National Polytechnic Institute (IPN) utilizzando un metodo brevettato in Messico (MX/a/2011/013852), USA (US9328152B2 ), UE (EPA-126128), Canada (2860260), Perù (000969-2014/DIN) e Colombia (14138326).

DLE è un farmaco complesso, il principio attivo è costituito da più unità peptidiche. Pertanto, DLE non può essere completamente caratterizzato, richiedendo l'applicazione di tecniche analitiche in grado di descrivere il comportamento complessivo di tutti i suoi componenti (polidispersità del peptide).

Sono state utilizzate due tecniche ortogonali per determinare il peso molecolare dei componenti peptidici di DLE in base alla loro migrazione attraverso una matrice polimerica. Il peso molecolare di 10 kDa è stato determinato mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide in condizioni di denaturazione (SDS-PAGE), mentre un peso molecolare inferiore a 15 kDa è stato determinato mediante cromatografia di esclusione molecolare.

La natura peptidica del DLE è stata dimostrata utilizzando un metodo dell'amminogramma. Questo metodo include l'idrolisi acida dei componenti peptidici fino all'ottenimento di amminoacidi liberi, che vengono derivatizzati e identificati in base al tempo di ritenzione di uno standard di amminoacidi mediante cromatografia in fase inversa (RP-UPLC). Inoltre, i peptidi di questo farmaco sono stati determinati per essere altamente solubili mediante RP-UPLC accoppiato a UV, mentre la spettrometria di massa, accoppiata a RP-UPLC, ha mostrato modelli di ionizzazione coerenti.

Studi non clinici e clinici rilevanti per questa ricerca. Sperimentalmente, in un modello murino di infezione virale, la somministrazione di DLE ha mostrato una diminuzione delle concentrazioni sieriche di TNF e IL-6, accompagnata da un aumento di IFN. Nell'uomo, l'eziologia virale è responsabile del 90-95% dei casi di infezioni delle vie respiratorie. I virus comuni coinvolti nelle malattie respiratorie sono i rinovirus (~50%), i coronavirus (~10%), gli adenovirus, il virus respiratorio sinciziale, l'influenza e i virus parainfluenzali (che generalmente sommano tra il 10% e il 15%), il metapneumovirus umano (< 5%). La prima evidenza che il DLE potrebbe avere un effetto terapeutico nelle infezioni respiratorie è emersa dall'analisi di una serie di casi (36 adulti e 63 bambini) con rinite allergica che hanno ricevuto DLE in aggiunta al trattamento standard. L'11% degli adulti e il 25,4% dei bambini hanno riportato una diminuzione della frequenza delle infezioni respiratorie. Allo stesso modo, in una serie di 70 adulti e 54 bambini con asma moderato persistente che hanno ricevuto un trattamento con DLE come terapia adiuvante, il 44% degli adulti e il 31% dei bambini hanno riportato una diminuzione della frequenza delle infezioni respiratorie, oltre al miglioramento della sintomi. In uno studio su 52 individui, l'efficacia del DLE è stata valutata riducendo la gravità e la frequenza dei sintomi infettivi. Tale studio ha mostrato una diminuzione della frequenza e della gravità dei sintomi respiratori infettivi (77,1%) nei pazienti pediatrici. In confronto, l'82,4% degli adulti diminuisce la frequenza e/o diminuisce la gravità dei sintomi respiratori infettivi. In un follow-up clinico di pazienti pediatrici con sepsi a cui è stato aggiunto il DLE al trattamento standard, la riduzione dei livelli di proteina C-reattiva, la riduzione della conta dei neutrofili a 72 ore dopo il ricovero e un aumento del tasso di sopravvivenza del 30% è stato segnalato.

SARS-CoV-2 induce danni polmonari significativi a causa di un'attività infiammatoria incontrollata e disregolata, quindi sono stati suggeriti farmaci immunomodulatori come trattamento. I risultati relativi al DLE supportano la loro capacità immunomodulatoria come potenziale strumento terapeutico nelle malattie respiratorie infettive con una componente infiammatoria prominente.

Obbiettivo primario. Generare informazioni sull'efficacia del DLE come ausilio nel trattamento sintomatico, riducendo i segni e i sintomi dell'infezione respiratoria acuta (casi sospetti/confermati di COVID-19).

Obiettivi secondari.

1. Per valutare il deterioramento clinico e i dati di allarme respiratorio.
2. Valutare la durata delle manifestazioni cliniche.
3. Per esplorare i cambiamenti delle citochine
4. Ottenere dati sulla sicurezza del DLE come ausilio nel trattamento sintomatico dell'infezione respiratoria acuta (casi sospetti/confermati di COVID-19).
5. Generare informazioni per convalidare la scala di emergenza (CS) per valutare la gravità della malattia respiratoria acuta (casi sospetti/confermati di COVID-19).

Ipotesi. L'aggiunta di DLE al trattamento sintomatico ridurrà i segni ei sintomi dell'infezione respiratoria acuta.

Il metodo di reclutamento sarà realizzato per via telematica.

L'infezione respiratoria acuta sarà classificata in base ai suoi sintomi clinici, seguendo la linea guida clinica messicana in cui la malattia COVID-19 è suddivisa in casi non gravi e gravi. La valutazione clinica del paziente sarà valutata da un CS progettato per questo studio e comprende tre voci principali suddivise in voci minori (range da 0 a 4 in ciascuna):

Sintomi generali: febbre, mal di testa Sintomi respiratori delle vie aeree superiori: starnuti, congestione nasale, naso che cola Sintomi respiratori delle vie aeree inferiori: tosse, dispnea e dolore o senso di costrizione o oppressione al torace.

Statistiche. Quattro popolazioni saranno prese in considerazione per l'analisi: individui randomizzati nello studio o set completo di analisi (FAS), popolazione di sicurezza (SP), popolazione dell'intenzione di trattare (ITT) e popolazione per protocollo (PP).

La popolazione FAS sarà composta da tutti gli individui che sono stati randomizzati nello studio (gli viene assegnato un numero casuale). La popolazione ITT sarà composta da tutti i pazienti che sono stati randomizzati, che hanno ricevuto almeno una dose del farmaco in studio e che hanno avuto almeno una valutazione degli endpoint primari o secondari dopo la valutazione al basale. Seguendo il principio dell'intenzione del trattamento, i pazienti saranno analizzati in base al trattamento assegnato durante la randomizzazione. L'SP sarà composto da tutti i pazienti che hanno ricevuto almeno una dose del farmaco in studio e che hanno almeno una valutazione della sicurezza dopo la valutazione di base. I pazienti saranno analizzati in base al trattamento che hanno ricevuto. Come nota di chiarimento, l'affermazione che il paziente non ha eventi avversi costituisce una valutazione di sicurezza. Il PP sarà composto da tutti i pazienti della popolazione ITT che completano tutte le visite, che hanno una valutazione accurata della variabile di efficacia primaria e che non contengono violazioni significative del protocollo.

Metodi statistici. I dati demografici, la storia clinica e le principali variabili di efficacia al basale per tutti i pazienti randomizzati saranno riassunti per gruppo di trattamento in tabelle (numero e percentuale) per le variabili qualitative; e nelle tabelle contenenti media, deviazione standard, mediana, minimo e massimo, per gruppo di trattamento, per le variabili quantitative. Verrà analizzato un confronto dei gruppi alla visita di riferimento utilizzando test Chi-quadrato per variabili qualitative e test t di studenti a due campioni per variabili quantitative (i valori p saranno forniti solo a scopo descrittivo). Inoltre, la storia medica, i farmaci concomitanti, le comorbidità saranno riassunte utilizzando tabelle di frequenza.

Il risultato principale. Il risultato primario di efficacia sarà la misurazione del punteggio del CS alla fine del trattamento o all'interruzione anticipata, nella popolazione ITT. L'algoritmo dell'imputazione dell'ultima osservazione riportata (LOCF) verrà applicato nel caso di pazienti che si ritirano, interrompono la terapia o si ritirano dallo studio. L'analisi primaria verrà eseguita utilizzando la popolazione ITT. Questa analisi sarà eseguita anche nella popolazione PP per valutare la robustezza dei risultati. L'esito primario sarà analizzato con un modello di covarianza che include il gruppo di trattamento, il valore basale e il centro.

L'ipotesi esplorativa dell'obiettivo primario è stabilire se potrebbe esserci una differenza nella diminuzione del punteggio del CS alla fine del trattamento, secondo un approccio di ipotesi di superiorità descritto di seguito:

Ho: µPlacebo - µDLE>0 Ha: µPlacebo - µDLE<0

La possibile superiorità dell'aggiunta di DLE come ausilio al trattamento sintomatico rispetto al trattamento sintomatico/placebo sarà stabilita se il limite superiore dell'intervallo di confidenza bilaterale al 95% per la differenza µPlacebo-µDLE è inferiore a 0.

Esiti secondari. La comparsa di dati di allarme respiratorio sarà identificata nei gruppi di studio, presentando i risultati in un grafico di frequenza con la proporzione di pazienti che hanno presentato dati di allarme per gruppo. Sarà analizzato utilizzando il test Chi-Quadro. La durata delle manifestazioni cliniche corrisponde al numero di giorni con uno qualsiasi dei segni e sintomi descritti nel CS. Le statistiche descrittive saranno eseguite in ciascun gruppo di trattamento; il confronto sarà effettuato utilizzando il t-test di Student. I cambiamenti immunologici sono definiti come cambiamenti nella conta totale dei leucociti, linfociti totali, VES e concentrazione sierica di CRP, procalcitonina, D-dimero, ferritina, CK, mioglobina, IL-6, TNF, interferoni e anticorpi specifici per il virus. Verranno presentate statistiche descrittive per gruppo di trattamento rispetto alla visita, nonché la percentuale di pazienti che mostrano la normalizzazione dei valori durante il trattamento.

Misura di prova. A causa della mancanza di informazioni sull'efficacia del farmaco in studio nei casi di infezione respiratoria acuta da COVID-19, il calcolo statistico della dimensione del campione non si applica. Tuttavia, come esercizio descrittivo, data l'attuale contingenza dovuta alla pandemia di COVID-19, in questo studio viene proposta una stima della dimensione del campione basata sul CS che è stato specificamente progettato per questo studio. Il punteggio di contingenza varia da 0 a 32, considerando che la popolazione dello studio è composta da pazienti non gravi, la media del punteggio corrisponderà all'ordine di 16 punti con una deviazione standard di 4. Si è anche ipotizzato che il comportamento del punteggio sia quello di un variabile continua con distribuzione normale.

La procedura di calcolo della dimensione del campione è per mezzo dell'equazione Julius 2004/FARTSSIE22 per disegni di superiorità in parallelo con due gruppi (DLE vs. Placebo). Secondo i seguenti valori:

UN. Errore di tipo I: 0,05 (5%); B. Errore di tipo II: 0,2 (20%). Potenza: 1-b: 0,8 (80%) Deviazione standard proposta: 4 Differenza da rilevare tra i gruppi: 1 Rapporto sulla dimensione del campione tra i gruppi: 1:1 (bilanciato) La dimensione del campione calcolata è 253 per gruppo. Un ulteriore 10% (q) sarà incluso per compensare i ritiri dallo studio o dal trattamento; pertanto, 562 pazienti (nt) 281 saranno randomizzati per trattamento in modo da avere il numero stimato di pazienti per il test di ipotesi. nt=n/1-q =506/0.9=562

Procedure per spiegare i dati mancanti. I dati mancanti per le variabili misurate in una singola occasione non possono essere sostituiti e quell'individuo non può essere incluso nell'analisi. Per i dati misurati più di una volta, in caso di dati mancanti, verrà preso in considerazione l'ultimo valore misurato dopo la linea di base. (LOCF)

Procedure per la segnalazione di eventuali scostamenti dal piano statistico. Se ci sono scostamenti dal piano statistico originale, questi saranno descritti e giustificati nella relazione finale.

Selezione degli individui da includere nell'analisi. Saranno inclusi nell'analisi tutti gli individui randomizzati che hanno ricevuto almeno una dose del prodotto sperimentale sotto il massimo dell'ITT.

Accesso alle informazioni. Lo studio sarà monitorato da personale specifico; saranno consentiti e facilitati ispezioni e audit interni ed esterni, consentendo l'accesso alle informazioni mantenendo la riservatezza dei soggetti dello studio.