Klinische Wirkung von dialysierbarem Leukozytenextrakt in Verdachts- oder bestätigten Fällen von COVID-19 (FUTURE-T) (FUTURE-T)

Dialysierbarer Leukozytenextrakt (DLE) (Transferon oral®) ist ein aus menschlichen Leukozyten gewonnener dialysierter Extrakt. Sein Wirkstoff ist eine komplexe Mischung niedermolekularer Peptide, die aus Dialyse (12 kDa) und anschließender Ultrafiltration (10 kDa) von lysierten Leukozyten- und Blutplättchenkonzentraten gewonnen werden. Dieses Produkt wird vom Laboratory of Scientific Research (Pharma-FT) an der Nacional School of Biological Sciences (ENCB), National Polytechnic Institute (IPN) unter Verwendung eines patentierten Verfahrens in Mexiko (MX/a/2011/013852), USA (US9328152B2) hergestellt ), EU (EPA-126128), Kanada (2860260), Peru (000969-2014/DIN) und Kolumbien (14138326).

DLE ist ein komplexes Medikament, das aktive Prinzip sind mehrere Peptideinheiten. Daher kann DLE nicht vollständig charakterisiert werden, was die Anwendung analytischer Techniken erfordert, die das Gesamtverhalten aller seiner Komponenten (Peptid-Polydispersität) beschreiben können.

Zwei orthogonale Techniken wurden verwendet, um das Molekulargewicht der Peptidkomponenten von DLE basierend auf ihrer Wanderung durch eine Polymermatrix zu bestimmen. Das Molekulargewicht von 10 kDa wurde durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese unter denaturierenden Bedingungen (SDS-PAGE) bestimmt, während ein Molekulargewicht von weniger als 15 kDa durch Molekularausschlusschromatographie bestimmt wurde.

Die Peptidnatur von DLE wurde unter Verwendung eines Aminogrammverfahrens demonstriert. Dieses Verfahren beinhaltet die saure Hydrolyse der Peptidkomponenten, bis freie Aminosäuren erhalten werden, die derivatisiert und anhand der Retentionszeit eines Aminosäurestandards mittels Umkehrphasenchromatographie (RP-UPLC) identifiziert werden. Darüber hinaus wurde festgestellt, dass die Peptide dieses Arzneimittels durch RP-UPLC, gekoppelt an UV, hochlöslich sind, während Massenspektrometrie, gekoppelt an RP-UPLC, konsistente Ionisationsmuster zeigte.

Nicht-klinische und klinische Studien, die für diese Forschung relevant sind. Experimentell zeigte die Verabreichung von DLE in einem Mausmodell einer Virusinfektion eine Abnahme der Serumkonzentrationen für TNF und IL-6, begleitet von einem Anstieg von IFN. Beim Menschen ist die virale Ätiologie für 90–95 % der Fälle von Atemwegsinfektionen verantwortlich. Die häufigsten Viren, die an Atemwegserkrankungen beteiligt sind, sind Rhinoviren (ca. 50 %), Coronaviren (ca. 10 %), Adenoviren, Respiratory Syncytial Virus, Influenza- und Parainfluenzaviren (die im Allgemeinen zwischen 10 % und 15 % ausmachen), Humanes Metapneumovirus (< 5 %). Der erste Hinweis, dass DLE eine therapeutische Wirkung bei Atemwegsinfektionen haben könnte, ergab sich aus der Analyse einer Reihe von Fällen (36 Erwachsene und 63 Kinder) mit allergischer Rhinitis, die DLE zusätzlich zur Standardbehandlung erhielten. 11 % der Erwachsenen und 25,4 % der Kinder berichteten über eine Abnahme der Häufigkeit von Atemwegsinfektionen. In ähnlicher Weise berichteten in einer Serie von 70 Erwachsenen und 54 Kindern mit persistierendem mittelschwerem Asthma, die eine Behandlung mit DLE als adjuvante Therapie erhielten, 44 % der Erwachsenen und 31 % der Kinder eine Abnahme der Häufigkeit von Atemwegsinfektionen zusätzlich zur Verbesserung der Allergie Symptome. In einer Studie mit 52 Personen wurde die Wirksamkeit von DLE durch Verringerung der Schwere und Häufigkeit von Infektionssymptomen bewertet. Diese Studie zeigte eine Abnahme der Häufigkeit und des Schweregrades der infektiösen Atemwegssymptome (77,1 %) bei pädiatrischen Patienten. Im Vergleich dazu verringern 82,4 % der Erwachsenen die Häufigkeit und/oder den Schweregrad von infektiösen Atemwegssymptomen. In einer klinischen Nachbeobachtung von pädiatrischen Patienten mit Sepsis, denen DLE zur Standardbehandlung hinzugefügt wurde, war eine Abnahme der C-reaktiven Proteinspiegel, eine Abnahme der Neutrophilenzahl 72 Stunden nach dem Krankenhausaufenthalt und eine Erhöhung der Überlebensrate von 30 % zu verzeichnen gemeldet.

SARS-CoV-2 verursacht aufgrund unkontrollierter und fehlregulierter Entzündungsaktivität erhebliche Lungenschäden, dann wurden immunmodulatorische Medikamente als Behandlung vorgeschlagen. Die Ergebnisse im Zusammenhang mit DLE unterstützen ihre immunmodulatorische Kapazität als potenzielles therapeutisches Instrument bei infektiösen Atemwegserkrankungen mit einer herausragenden entzündlichen Komponente.

Hauptziel. Gewinnung von Informationen über die Wirksamkeit von DLE als Hilfsmittel bei der symptomatischen Behandlung durch Verringerung der Anzeichen und Symptome einer akuten Atemwegsinfektion (Verdachts-/Bestätigungsfälle von COVID-19).

Sekundäre Ziele.

1. Auswertung der klinischen Verschlechterung und Atemalarmdaten.
2. Um die Dauer der klinischen Manifestationen zu beurteilen.
3. Zytokinveränderungen zu untersuchen
4. Erhebung von Daten zur Sicherheit von DLE als Hilfsmittel bei der symptomatischen Behandlung akuter Atemwegsinfektionen (Verdachts-/Bestätigungsfälle von COVID-19).
5. Generierung von Informationen zur Validierung der Kontingenzskala (CS) zur Beurteilung der Schwere akuter Atemwegserkrankungen (Verdachts-/Bestätigungsfälle von COVID-19).

Hypothese. Die Zugabe von DLE zur symptomatischen Behandlung reduziert die Anzeichen und Symptome einer akuten Atemwegsinfektion.

Das Rekrutierungsverfahren wird elektronisch durchgeführt.

Die akute Atemwegsinfektion wird nach ihren klinischen Symptomen gemäß der mexikanischen klinischen Leitlinie klassifiziert, in der die COVID-19-Erkrankung in nicht schwerwiegende und schwere Fälle unterteilt wird. Die klinische Bewertung des Patienten wird von einem für diese Studie entwickelten CS bewertet und umfasst drei Hauptpunkte, die in Nebenpunkte unterteilt sind (Bereich jeweils 0 bis 4):

Allgemeine Symptome: Fieber, Kopfschmerzen Symptome der Atemwege der oberen Atemwege: Niesen, verstopfte Nase, laufende Nase Symptome der Atemwege der unteren Atemwege: Husten, Dyspnoe und Schmerzen oder Engegefühl oder Engegefühl in der Brust.

Statistiken. Vier Populationen werden für die Analyse berücksichtigt: randomisierte Personen in der Studie oder im vollständigen Analyseset (FAS), Sicherheitspopulation (SP), die Population der Intention-to-treat (ITT) und Population per Protocol (PP).

Die FAS-Population besteht aus allen Personen, die in die Studie randomisiert wurden (ihnen wird eine Zufallszahl zugewiesen). Die ITT-Population besteht aus allen Patienten, die randomisiert wurden, die mindestens eine Dosis des Studienmedikaments erhalten haben und bei denen mindestens eine Bewertung der primären oder sekundären Endpunkte nach der Baseline-Bewertung durchgeführt wurde. Nach dem Grundsatz der Behandlungsabsicht werden die Patienten gemäß der bei der Randomisierung zugewiesenen Behandlung analysiert. Der SP besteht aus allen Patienten, die mindestens eine Dosis des Studienmedikaments erhalten haben und für die mindestens eine Sicherheitsbewertung nach der Baseline-Bewertung durchgeführt wurde. Die Patienten werden entsprechend der Behandlung, die sie erhalten haben, analysiert. Zur Klarstellung: Die Aussage, dass der Patient keine unerwünschten Ereignisse hat, stellt eine Sicherheitsbewertung dar. Der PP besteht aus allen Patienten in der ITT-Population, die alle Besuche abschließen, die eine genaue Bewertung der primären Wirksamkeitsvariablen haben und die keine signifikanten Protokollverstöße aufweisen.

Statistische Methoden. Demografische Daten, klinische Vorgeschichte und wichtige Basislinien-Wirksamkeitsvariablen für alle randomisierten Patienten werden nach Behandlungsgruppe in Tabellen (Anzahl und Prozent) für qualitative Variablen zusammengefasst; und in Tabellen, die den Durchschnitt, die Standardabweichung, den Median, das Minimum und das Maximum nach Behandlungsgruppe für die quantitativen Variablen enthalten. Ein Vergleich der Gruppen beim Baseline-Besuch wird mit Chi-Quadrat-Tests für qualitative Variablen und Schüler-t-Tests mit zwei Stichproben für quantitative Variablen analysiert (p-Werte werden nur zu beschreibenden Zwecken bereitgestellt). Zusätzlich werden Anamnese, Begleitmedikationen, Komorbiditäten anhand von Häufigkeitstabellen zusammengefasst.

Primäres Ergebnis. Das primäre Ergebnis der Wirksamkeit ist die Messung des CS-Scores am Ende der Behandlung oder bei vorzeitigem Abbruch in der ITT-Population. Bei Patienten, die aus der Studie ausscheiden, die Therapie abbrechen oder aus der Studie ausscheiden, wird der Algorithmus der Imputation des letzten Beobachtungsvortrags (LOCF) angewendet. Die primäre Analyse wird unter Verwendung der ITT-Population durchgeführt. Diese Analyse wird auch in der PP-Population durchgeführt, um die Robustheit der Ergebnisse zu beurteilen. Das primäre Ergebnis wird mit einem Kovarianzmodell analysiert, das die Behandlungsgruppe, den Ausgangswert und das Zentrum umfasst.

Die explorative Hypothese des primären Ziels besteht darin, festzustellen, ob es einen Unterschied in der Abnahme des CS-Scores am Ende der Behandlung unter einem unten beschriebenen Ansatz der Überlegenheitshypothese geben könnte:

Ho: µPlacebo - µDLE>0 Ha: µPlacebo - µDLE<0

Eine mögliche Überlegenheit der DLE-Zugabe als Hilfsmittel zur symptomatischen Behandlung gegenüber einer symptomatischen/Placebo-Behandlung wird festgestellt, wenn die obere Grenze des zweiseitigen 95 %-Konfidenzintervalls für die Differenz µPlacebo-µDLE kleiner als 0 ist.

Sekundäre Ergebnisse. Das Auftreten von Atemalarmdaten wird in den Studiengruppen identifiziert, wobei die Ergebnisse in einem Häufigkeitsdiagramm mit dem Anteil der Patienten, die Alarmdaten pro Gruppe präsentierten, dargestellt werden. Es wird mit dem Chi-Quadrat-Test analysiert. Die Dauer der klinischen Manifestationen entspricht der Anzahl der Tage mit einem der im CS beschriebenen Anzeichen und Symptome. Beschreibende Statistiken werden in jeder Behandlungsgruppe durchgeführt; der Vergleich wird unter Verwendung des Schüler-t-Tests durchgeführt. Immunologische Veränderungen sind definiert als Veränderungen der Gesamtleukozytenzahl, der Gesamtlymphozyten, der BSG und der Serumkonzentration von CRP, Procalcitonin, D-Dimer, Ferritin, CK, Myoglobin, IL-6, TNF, Interferonen und spezifischen Antikörpern für das Virus. Deskriptive Statistiken werden nach Behandlungsgruppe vs. Visite präsentiert, sowie der Anteil der Patienten, die eine Normalisierung der Werte während der Behandlung zeigen.

Stichprobengröße. Aufgrund fehlender Informationen zur Wirksamkeit des Studienmedikaments bei akuter Atemwegsinfektion mit COVID-19 entfällt die statistische Berechnung des Stichprobenumfangs. Als beschreibende Übung wird jedoch angesichts der aktuellen Kontingenz durch die COVID-19-Pandemie in dieser Studie eine Schätzung der Stichprobengröße basierend auf dem CS vorgeschlagen, der speziell für diese Studie entwickelt wurde. Der Kontingenzscore reicht von 0 bis 32, wenn man bedenkt, dass es sich bei der Studienpopulation um nicht schwere Patienten handelt, entspricht der Scoring-Durchschnitt der Größenordnung von 16 Punkten mit einer Standardabweichung von 4. Es wurde auch angenommen, dass das Scoring-Verhalten dem von a entspricht stetige Variable mit Normalverteilung.

Das Verfahren zur Berechnung der Stichprobengröße erfolgt anhand der Julious 2004/FARTSSIE22-Gleichung für Überlegenheitsdesigns parallel mit zwei Gruppen (DLE vs. Placebo). Nach folgenden Werten:

A. Fehler 1. Art: 0,05 (5 %); B. Fehler 2. Art: 0,2 (20 %). Trennschärfe: 1-b: 0,8 (80 %) Vorgeschlagene Standardabweichung: 4 Zu erkennender Unterschied zwischen den Gruppen: 1 Verhältnis der Stichprobengröße zwischen den Gruppen: 1:1 (ausgeglichen) Die berechnete Stichprobengröße beträgt 253 pro Gruppe. Weitere 10 % (q) werden eingeschlossen, um Abbrüche von der Studie oder Behandlung auszugleichen; daher werden 562 Patienten (nt) 281 nach Behandlung randomisiert, um die geschätzte Anzahl von Patienten für den Hypothesentest zu haben. nt=n/1-q=506/0,9=562

Verfahren zur Erklärung fehlender Daten. Fehlende Daten für die Variablen, die bei einer einzigen Gelegenheit gemessen wurden, können nicht ersetzt werden, und diese Person kann nicht in die Analyse einbezogen werden. Bei Daten, die mehr als einmal gemessen wurden, wird bei fehlenden Daten der letzte nach der Basislinie gemessene Wert berücksichtigt. (LOCF)

Verfahren zur Meldung von Abweichungen vom statistischen Plan. Bei Abweichungen von der ursprünglichen statistischen Planung werden diese im Abschlussbericht beschrieben und begründet.

Auswahl der in die Analyse einzubeziehenden Personen. Alle randomisierten Personen, die mindestens eine Dosis des Prüfpräparats unter der Maxime ITT erhalten haben, werden in die Analyse eingeschlossen.

Zugang zu Informationen. Die Studie wird von speziellem Personal überwacht; Interne und externe Inspektionen und Audits werden zugelassen und erleichtert, wodurch der Zugang zu Informationen ermöglicht wird, während die Vertraulichkeit der Studienteilnehmer gewahrt bleibt.