Endotoxinové jádro u hemodialyzovaných pacientů s onemocněním periferních tepen

Design studie a pacienti Toto je průřezová studie zahrnující hemodialyzované pacienty z hemodialyzační jednotky Tungs' Taichung MetroHarbor Hospital na Tchaj-wanu. Celkem 500 pacientů starších 20 let, kteří podstupují hemodialýzu ultračistým dialyzátem třikrát týdně po dobu alespoň 1 měsíce, má nárok na zařazení. Vyřadíme pacienty dialyzované katetrem; kteří měli akutní infekci vyžadující hospitalizaci; a kteří měli základní malignitu nebo autoimunitní onemocnění. Kromě toho budou vyloučeni pacienti, kteří se odmítnou zúčastnit. Informace o demografii účastníků a komorbiditách budou získány z rozhovorů a přezkoumání lékařských záznamů v době zápisu. Diabetes mellitus je definován vlastní anamnézou nebo užíváním antidiabetických léků. Hypertenze byla definována jako systolický krevní tlak ≥140 mmHg, diastolický ≥90 mmHg nebo použití antihypertenziv. Preexistující KVO je definováno jako onemocnění koronárních tepen, jak je dokumentováno koronarografií nebo anamnézou infarktu myokardu, městnavého srdečního selhání třídy III nebo IV nebo mrtvice. Tato studie bude v souladu s Helsinskou deklarací a bude žádat o schválení institucionální revizní radou nemocnice Tungs' Taichung MetroHarbor Hospital. Všichni účastníci dají svůj písemný informovaný souhlas.

Laboratorní měření Vzorky krve před dialýzou se odebírají v den uprostřed týdne. Do 30 minut po odběru vzorků bude zbývající krev centrifugována při 3 000 g po dobu 10 minut, okamžitě rozdělena na alikvoty a zmrazena při -70 °C do další analýzy. Celkový cholesterol v séru se měří reakcí cholesterolesterázy/cholesteroloxidázy/peroxidázy pomocí Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, USA). HDL cholesterol se kvantifikuje po vysrážení polyethylenglykolem při teplotě místnosti. Koncentrace glukózy v séru se měří glukózooxidázovou metodou. Nízkohustotní lipoproteinový cholesterol se vypočítá pomocí Friedewaldova vzorce. Celkové sérové ​​triglyceridy se měří reakcí glycerolu/fosfátu/oxidázy a peroxidázy. Sérové ​​hladiny vysoce citlivého C-reaktivního proteinu (hsCRP) se měří pomocí Behringova nephelometru II (Dade Behring, Tokio, Japonsko). Sérové ​​hladiny IL-6 a sCD14 jsou měřeny komerčně dostupným enzymem-linked immunosorbent assay (Quantikine HS Immunoassay kit, R&D System, Minneapolis, MN, USA). LBP bude stanoven ze vzorků séra a kontrol pomocí standardizovaných metod imunosorbentního testu s enzymatickým spojením (HK315-02, HyCult Biotech Inc., Uden, Nizozemí) a pro variaci mezi testy se použije sérum od 20 normálních kontrolních subjektů. Sérová endotoxinová jádrová protilátka bude testována pomocí komerčně dostupného testu EndoCab IgG ELISA (Hycult Biotech Inc., Nizozemí). Kromě toho budou sérové ​​koncentrace LCN-2 (Lipocalin-2) a YKL-40 stanoveny pomocí enzymatických imunosorbentních testů

Měření endotoxinu Hladiny endotoxinu se měří pomocí kinetického chromogenního testu Charles River Laboratories (CRL), Endochrome-K. Podrobnější popis použité metodiky byl popsán jinde [37]. Vzorky se rozmrazí a zředí na 1 : 20 biodispergačním činidlem (CRL, BD100) a zahřejí na 75 °C po dobu 15 minut. Standardní křivka (0,005 EU/ml a 5 EU/ml) se připraví za použití kontrolního standardního endotoxinu dodaného CRL. Pokud je detekován endotoxin, vzorky se poté rekonstituují pufrem specifickým pro endotoxin (Charles River Endosafe BG-120), aby se zabránilo jakékoli falešně pozitivní reakci související s β-glukanem. Pro každý vzorek je zahrnuta pozitivní kontrola produktu, aby se eliminovala možnost zvýšení nebo inhibice měření endotoxinu. Absorbance při 405 nm se měří ve 30sekundových intervalech po dobu celkem 3600 sekund za použití čtečky destiček Biotek ELx808. Testovací reakce se udržují při 37 °C po celou dobu testu. Software Charles River Endosafe, EndoScan V se používá ke generování standardní křivky a analýze dat s použitím doby nástupu 0,1 jednotky absorbance.