Endotoxinekern bij hemodialysepatiënten met perifere arterieziekte

Onderzoeksopzet en patiënten Dit is een transversaal onderzoek met hemodialysepatiënten van de hemodialyse-afdeling van Tungs' Taichung MetroHarbor Hospital, Taiwan. In totaal komen 500 patiënten ouder dan 20 jaar die hemodialyse ondergaan met ultrapuur dialysaat driemaal per week gedurende ten minste 1 maand in aanmerking voor inschrijving. Patiënten die zijn gedialyseerd met een katheter sluiten we uit; die een acute infectie had waarvoor ziekenhuisopname nodig was; en die een onderliggende maligniteit of auto-immuunziekte hadden. Daarnaast worden patiënten die weigeren deel te nemen uitgesloten. Informatie over de demografische gegevens en comorbiditeit van deelnemers zal worden verkregen uit interviews en beoordelingen van medische dossiers op het moment van inschrijving. Diabetes mellitus wordt gedefinieerd door zelfgerapporteerde geschiedenis of gebruik van antidiabetica. Hypertensie werd gedefinieerd als systolische bloeddruk ≥140 mmHg, diastolische bloeddruk ≥90 mmHg of gebruik van antihypertensiva. Reeds bestaande HVZ wordt gedefinieerd als coronaire hartziekte, zoals gedocumenteerd door coronaire angiografie of een voorgeschiedenis van myocardinfarct, klasse III of IV congestief hartfalen of beroerte. Deze studie zal voldoen aan de Verklaring van Helsinki en zal ter goedkeuring worden aangevraagd bij de Institutional Review Board van Tungs' Taichung MetroHarbor Hospital. Alle deelnemers geven hun schriftelijke geïnformeerde toestemming.

Laboratoriummetingen Predialysebloedmonsters worden genomen op een doordeweekse dag. Binnen 30 minuten na bemonstering wordt het resterende bloed 10 minuten gecentrifugeerd bij 3.000 g, onmiddellijk verdeeld en ingevroren bij -70 °C tot verdere analyse. Het totale serumcholesterol wordt gemeten door de reactie van cholesterolesterase/cholesteroloxidase/peroxidase, met behulp van Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, VS). HDL-cholesterol wordt gekwantificeerd na precipitatie met polyethyleenglycol bij kamertemperatuur. Serumglucoseconcentraties worden gemeten met de glucose-oxidasemethode. Lipoproteïne-cholesterol met lage dichtheid wordt berekend met behulp van de Friedewald-formule. Totale serumtriglyceriden worden gemeten door de reactie van glycerol/fosfaat/oxidase en peroxidase. De serumspiegels van hooggevoelig C-reactief proteïne (hsCRP) worden gemeten met behulp van een Behring Nephelometer II (Dade Behring, Tokyo, Japan). Serumniveaus van IL-6 en sCD14 worden gemeten met een in de handel verkrijgbare enzym-gekoppelde immunosorbenttest (Quantikine HS Immunoassay-kit, R&D System, Minneapolis, MN, VS). De LBP zal worden bepaald uit serummonsters en controles met behulp van gestandaardiseerde enzym-gekoppelde immunosorbent-assaymethoden (HK315-02, HyCult Biotech Inc., Uden, Nederland), en serum van 20 normale controlepersonen wordt gebruikt voor interassay-variatie. Serum-endotoxinekern-antilichaam zal worden getest met behulp van een in de handel verkrijgbare EndoCab IgG ELISA-assay (Hycult Biotech Inc., Nederland). Daarnaast zullen serum LCN-2 (Lipocaline-2) en YKL-40 concentraties worden bepaald met behulp van enzymgekoppelde immunosorbentassays

Endotoxinemeting Endotoxineniveaus worden gemeten met behulp van een Charles River Laboratories (CRL) Kinetic Chromogenic assay, Endochroom-K. Een meer gedetailleerde beschrijving van de gebruikte methodologie is elders beschreven [37]. Monsters worden ontdooid en verdund tot 1 : 20 met een biodispergeermiddel (CRL, BD100) en verwarmd tot 75°C gedurende 15 minuten. Een standaardkromme (0,005 EU/ml en 5 EU/ml) wordt bereid met behulp van controlestandaard-endotoxine geleverd door CRL. Als er endotoxine wordt gedetecteerd, worden de monsters vervolgens gereconstitueerd met een endotoxinespecifieke buffer (Charles River Endosafe BG-120) om elke β-glucaangerelateerde fout-positieve reactie te voorkomen. Voor elk monster wordt een positieve productcontrole meegeleverd om de mogelijkheid van versterking of remming van endotoxinemetingen uit te sluiten. De absorptie bij 405 nm wordt gemeten met tussenpozen van 30 seconden gedurende in totaal 3600 seconden met behulp van een Biotek ELx808 plaatlezer. De assayreacties worden gedurende de assayperiode op 37°C gehouden. Charles River Endosafe, EndoScan V-software wordt gebruikt om een ​​standaardcurve te genereren en gegevens te analyseren met een begintijd van 0,1 absorptie-eenheid.