Núcleo de endotoxinas en pacientes en hemodiálisis con enfermedad arterial periférica

Diseño del estudio y pacientes Este es un estudio transversal en el que participan pacientes de hemodiálisis de la unidad de hemodiálisis del Hospital MetroHarbor de Taichung de Tungs, Taiwán. Un total de 500 pacientes mayores de 20 años que reciben hemodiálisis con dializado ultrapuro tres veces por semana durante al menos 1 mes son elegibles para la inscripción. Excluiremos a los pacientes dializados con catéter; que tuvo una infección aguda que requirió hospitalización; y que tenían malignidad subyacente o enfermedades autoinmunes. Además, se excluirán los pacientes que se nieguen a participar. La información sobre la demografía y las comorbilidades de los participantes se obtendrá de entrevistas y revisiones de registros médicos en el momento de la inscripción. La diabetes mellitus se define por la historia autoinformada o el uso de medicamentos antidiabéticos. La hipertensión se definió como presión arterial sistólica ≥140 mmHg, diastólica ≥90 mmHg o uso de agentes antihipertensivos. La CVD preexistente se define como enfermedad de las arterias coronarias, documentada por angiografía coronaria o antecedentes de infarto de miocardio, insuficiencia cardíaca congestiva de clase III o IV o accidente cerebrovascular. Este estudio cumplirá con la Declaración de Helsinki y solicitará la aprobación de la Junta de Revisión Institucional del Hospital MetroHarbor de Taichung de Tungs. Todos los participantes darán su consentimiento informado por escrito.

Mediciones de laboratorio Las muestras de sangre previas a la diálisis se obtienen un día entre semana. Dentro de los 30 minutos posteriores al muestreo, la sangre restante se centrifugará a 3000 g durante 10 minutos, se dividirá en alícuotas inmediatamente y se congelará a -70 °C hasta su posterior análisis. El colesterol sérico total se mide a través de la reacción de colesterol esterasa/colesterol oxidasa/peroxidasa, utilizando Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, EE. UU.). El colesterol HDL se cuantifica después de la precipitación con polietilenglicol a temperatura ambiente. Las concentraciones de glucosa en suero se miden por el método de glucosa oxidasa. El colesterol de lipoproteínas de baja densidad se calcula utilizando la fórmula de Friedewald. Los triglicéridos séricos totales se miden mediante la reacción de glicerol/fosfato/oxidasa y peroxidasa. Los niveles séricos de proteína C reactiva de alta sensibilidad (hsCRP) se miden utilizando un nefelómetro Behring II (Dade Behring, Tokio, Japón). Los niveles séricos de IL-6 y sCD14 se miden mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas disponible comercialmente (kit de inmunoensayo Quantikine HS, R&D System, Minneapolis, MN, EE. UU.). El LBP se determinará a partir de muestras de suero y controles utilizando métodos estandarizados de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (HK315-02, HyCult Biotech Inc., Uden, Países Bajos), y se usará suero de 20 sujetos de control normales para la variación entre ensayos. El anticuerpo del núcleo de endotoxina sérica se analizará utilizando un ensayo ELISA EndoCab IgG disponible comercialmente (Hycult Biotech Inc., Países Bajos). Además, las concentraciones séricas de LCN-2 (Lipocalin-2) y YKL-40 se determinarán mediante ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas.

Medición de endotoxinas Los niveles de endotoxinas se miden utilizando un ensayo cromogénico cinético, Endochrome-K, de Charles River Laboratories (CRL). Una descripción más detallada de la metodología utilizada se ha descrito en otra parte [37]. Las muestras se descongelan y diluyen a 1:20 con un agente biodispersante (CRL, BD100) y se calientan a 75°C durante 15 minutos. Se prepara una curva estándar (0,005 UE/mL y 5 UE/mL) utilizando la endotoxina estándar de control suministrada por CRL. Si se detecta endotoxina, las muestras se reconstituyen con un tampón específico para endotoxinas (Charles River Endosafe BG-120) para evitar cualquier reacción falsa positiva relacionada con el β-glucano. Se incluye un control de producto positivo para cada muestra para eliminar la posibilidad de mejora o inhibición de la medición de endotoxinas. La absorbancia a 405 nm se mide a intervalos de 30 segundos durante un total de 3600 segundos utilizando un lector de placas Biotek ELx808. Las reacciones del ensayo se mantienen a 37°C durante todo el período del ensayo. Charles River Endosafe, el software EndoScan V se utiliza para generar una curva estándar y analizar datos utilizando un tiempo de inicio de 0,1 unidades de absorbancia.