Værdien af ​​I-Scan og konfokal laserendomomikroskopi til vurdering af kronisk inflammatorisk tarmsygdom (I-Scan-CLE-IBD)

Værdien af ​​I-Scan og Confocal Laser Endomikroskopi til vurdering af kronisk inflammatorisk tarmsygdom

Baggrund Koloskopi spiller en vigtig rolle i diagnosticering, vurdering af aktivitet, forlængelse og respons på terapi ved kronisk inflammatorisk tarmsygdom (IBD). Konventionel undersøgelse undervurderer sygdommens omfang og aktivitet sammenlignet med histologi, derfor er slimhindebiopsi en kritisk komponent i endoskopisk undersøgelse af disse patienter. At tage flere biopsier er tidskrævende, indebærer en lav, men ikke ubetydelig risiko for sekundær blødning, og forårsager en forsinkelse i diagnosen, mens man afventer histologisk analyse.

Konfokal laserendomikroskopi er dukket op i de senere år som en ny teknik, der faktisk muliggør in vivo mikroskopisk analyse under igangværende endoskopi. Endomikroskopi kan udføres enten med et dedikeret endoskop (eCLE) eller med miniprobe-baserede systemer (pCLE) [1]. Det er en kontrastbaseret teknik, hvor det mest udbredte middel er det intravenøst ​​administrerede fluorescein [2]. Det probebaserede endomikroskopisystem består af en fleksibel katetersonde, der repræsenterer et bundt af optiske fibre forbundet med et mikroobjektiv, en laserscanningsenhed og kontrol- og optagelsessoftwaren (Cellvizio; Mauna Kea Technology, Paris, Frankrig). De fleksible konfokale miniprober er specielt designet til at blive ført gennem arbejdskanalerne på standardendoskoper, galdekatetre eller kolangioskoper, og pCLE-systemet kan således nemt integreres i enhver endoskopi-enhed. Princippet i teknikken er baseret på en laserstråle med defineret bølgelængde, der fokuseres mod det målrettede væv, og det genfangede signal vises som 'optiske biopsier' i et enkelt vandret plan.

Den potentielle rolle af CLE er blevet undersøgt i patologi af både øvre og nedre mave-tarmkanal, hvilket viser god nøjagtighed til at forudsige den endelige histopatologiske diagnose baseret på øjeblikkelig evaluering af væv og vaskulære mønstre [3]. På grund af dets minimale scanningsområde er denne teknologi bedst brugt i forbindelse med andre "rødt flag"-teknikker til at screene slimhinden for områder af interesse, som derefter kan undersøges af CLE for en histologisk diagnose [4].

I-scan-teknologi (Pentax, Tokyo, Japan) er en ny billedforstærket endoskopisk teknik, der består af tre typer algoritmer: overfladeforbedring (SE; forbedring af strukturen gennem genkendelse af kanterne), kontrastforbedring (CE; forbedring af deprimerede områder og forskelle i struktur gennem farvet præsentation af områder med lav tæthed) og toneforstærkning (TE; forbedring skræddersyet til individuelle organer gennem modifikation af kombinationen af ​​RGB-komponenter for hver pixel) [5,6]. Ligesom smalbåndsbilleddannelse kan i-scan opnå en virtuel kromoendoskopi, men indtil nu har der ikke været undersøgelser til at bestemme denne teknologis rolle i evalueringen af ​​aktivitet ved inflammatorisk tarmsygdom [7].

Formålet med undersøgelsen Formålet med undersøgelsen er at sammenligne billeddiagnostiske fund af p-CLE i forbindelse med I-scan endoskopi med aktivitetsscore og histologisk diagnose.

Patienter og metoder Studiet vil prospektivt omfatte patienter med aktiv colitis ulcerosa eller Crohns sygdom, som opfylder inklusions- og eksklusionskriterierne. Alle patienter vil blive undersøgt ved konventionel koloskopi, efterfulgt af I-scan undersøgelse og p-CLE, og der vil blive taget biopsiprøver for hvert segment af tyktarmen. Derefter vil korrelationen mellem histologi som "guldstandard", aktivitetsscore (Mayo score for ulcerøs colitis, henholdsvis Crohns sygdoms aktivitetsindeks for Crohns sygdom) og billeddiagnostiske fund beregnes for både patologiske og normale områder.

Inklusionskriterier

• Alder > 18 år, mand eller kvinde
• Patienter diagnosticeret med aktiv ulcerøs colitis (MAYO-score >3) eller Crohns sygdom (CDAI-score >150), hvor der er indikation for behandling og koloskopi. Nydiagnosticerede såvel som patienter, der allerede er i oral 5-ASA-behandling, kan inkluderes.
• Underskrevet informeret samtykke til koloskopi og p-CLE undersøgelse Eksklusionskriterier
• Manglende afgivelse af informeret samtykke
• Patienter med kontraindikation til koloskopi
• Kendt allergi over for fluorescein
• Gravide eller ammende patienter
• Løbende systemisk immunsuppressiv behandling med prednisolon, azathioprin eller biologiske midler.

Data indsamlet for hver deltager vil omfatte:

• Personlige data (navn, efternavn, alder, køn)
• Resultater fra tidligere undersøgelser
• Klinisk evaluering (hyppighed af afføring, rektal blødning, feber, mavesmerter, ekstra intestinal manifestation, abdominal masse) og blodtal for aktivitetsindeksberegner (Mayo score for ulcerøs colitis, henholdsvis CDAI score for Crohns sygdom)
• Endoskopiske fund
• Histologiske og immunhistokemiske fund
• Molekylær analysefund

Billeddiagnostiske tests

• Alle patienter vil blive undersøgt ved I-scan koloskopi og graden og fordeling af den akutte inflammation vil blive vurderet.
• p-CLE undersøgelse vil følge, efter intravenøs administration af kontrastmidlet (2,5 ml fluorescein 10%), i hvert segment af tyktarmen i både normale og patologiske områder.
• Billeddata vil blive gemt digitalt til offline analyse (10-20 sekunders film for hvert undersøgt område).
• Biopsiprøver vil blive taget fra hvert område undersøgt af p-CLE til histologisk, immunhistokemisk og molekylær analyse.

Det biologiske materiale, der indsamles under undersøgelsen (dette vil omfatte en ml fuldblod og vævsbiopsier fra normalt væv og fra modificerede områder på 2 til 3 mm hver) vil blive frosset og opbevaret. Når det forventede antal deltagere er nået, vil prøverne gennemgå molekylære undersøgelser for at vurdere markørerne for angiogenese som beskrevet yderligere i protokollen. De biologiske materialer vil blive opbevaret og analyseret i en estimeret periode på 18 måneder fra forsøgets start. Efter afslutning af undersøgelsen vil biomaterialerne blive bortskaffet.

Biologiske prøver til molekylære tests:

• Blodprøver vil blive indsamlet før billeddannelsesprocedurer

  1. Til DNA-ekstraktion kan 2-5 ml blod opsamles i bøtter indeholdende EDTA og opbevares ved 4°C i en dag eller overføres til -80°C fryser for længere opbevaring
  2. Til RNA-ekstraktion skal 2-5 ml blod opsamles i PAX-beholdere og opbevares i maksimalt 2 timer ved stuetemperatur og derefter overføres til -80°C fryser til længere opbevaring
• Vævsprøver:

Mulige metoder til at stabilisere vævsprøver til yderligere molekylær analyse (RNA/DNA/protein):

1. 0,3-0,5 cm væv opbevares straks i et rør indeholdende RNAlater-opløsning i ca. 24 timer ved 4°C; herefter tages RNAlater-opløsningen ud af røret (under sterile forhold), og prøven fryses ved -80°C indtil RNA/DNA-ekstraktion.
2. 0,3-0,5 cm væv opbevares straks i et tomt kryogenrør og smides i en beholder, der indeholder flydende nitrogen eller tøris med methanol.

Primære resultatmål:

• p-CLE fund registreres og sammenlignes med fundene fra konventionel koloskopi og I-scan koloskopi.
• p-CLE og I-scan koloskopi-fund sammenlignes med den patologiske evaluering af vævsprøver.

Sekundære resultatmål:

• Effekt af terapi baseret på resultaterne af den konventionelle koloskopi, I-scan og p-CLE
• Registreringstid for proceduren.
• Registrering af mulige komplikationer

Risici og bivirkninger Komplikationer kan forekomme under koloskopi, men de er sjældne. Disse består af blødning på biopsistedet, som normalt er minimal, selvbegrænsende og sjældent kræver opfølgning. Perforering af tarmen er yderst sjælden. Kontrastmidlets (fluorescein) sikkerhedsprofil viste en meget lav forekomst af bivirkninger. Det er ikke nefrotoksisk, og forekomsten af ​​overfølsomhed eller alvorlige allergiske hændelser er lav. Fluorescein er godkendt til klinisk brug i EU-lande.