O valor do I-Scan e da endomicroscopia confocal a laser para a avaliação da doença inflamatória intestinal crônica (I-Scan-CLE-IBD)

O valor do I-Scan e da Endomicroscopia confocal a laser para a avaliação da doença inflamatória intestinal crônica

Antecedentes A colonoscopia desempenha um papel importante no diagnóstico, avaliação da atividade, extensão e resposta à terapia na doença inflamatória intestinal crônica (DII). O exame convencional subestima a extensão e a atividade da doença em comparação com a histologia, portanto, a biópsia da mucosa é um componente crítico do exame endoscópico desses pacientes. Fazer múltiplas biópsias é demorado, traz um risco baixo, mas não desprezível, de hemorragia secundária e causa um atraso no diagnóstico, enquanto se aguarda a análise histológica.

A endomicroscopia confocal a laser surgiu nos últimos anos como uma nova técnica que realmente permite a análise microscópica in vivo durante a endoscopia em andamento. A endomicroscopia pode ser realizada com um endoscópio dedicado (eCLE) ou com sistemas baseados em miniprobe (pCLE) [1]. É uma técnica baseada em contraste, sendo o agente mais utilizado a fluoresceína administrada por via intravenosa [2]. O sistema de endomicroscopia baseado em sonda consiste em uma sonda de cateter flexível que representa um feixe de fibras ópticas ligadas a uma microobjetiva, uma unidade de varredura a laser e o software de controle e aquisição (Cellvizio; Mauna Kea Technology, Paris, França). As minissondas confocais flexíveis foram projetadas especificamente para serem passadas pelos canais de trabalho de endoscópios padrão, cateteres biliares ou colangiscópios e, portanto, o sistema pCLE pode ser facilmente integrado a qualquer unidade de endoscopia. O princípio da técnica é baseado em um feixe de laser de comprimento de onda definido sendo focado no tecido alvo e o sinal recapturado é exibido como 'biópsias ópticas' em um único plano horizontal.

O papel potencial do CLE foi explorado na patologia do trato gastrointestinal superior e inferior, mostrando boa precisão para prever o diagnóstico histopatológico final com base na avaliação imediata do tecido e dos padrões vasculares [3]. Devido à sua área de varredura diminuta, esta tecnologia é melhor usada em conjunto com outras técnicas de "bandeira vermelha" para rastrear a mucosa em busca de áreas de interesse, que podem então ser examinadas por CLE para um diagnóstico histológico [4].

A tecnologia I-scan (Pentax, Tóquio, Japão) é uma nova técnica endoscópica de imagem aprimorada, composta por três tipos de algoritmos: aprimoramento de superfície (SE; aprimoramento da estrutura por meio do reconhecimento das bordas), aprimoramento de contraste (CE; aprimoramento de áreas deprimidas e diferenças na estrutura através da apresentação colorida de áreas de baixa densidade) e aprimoramento de tom (TE; aprimoramento adaptado para órgãos individuais através da modificação da combinação de componentes RGB para cada pixel) [5,6]. Como a imagem de banda estreita, o i-scan pode obter uma cromoendoscopia virtual, mas até agora não houve estudos para determinar o papel dessa tecnologia na avaliação da atividade na doença inflamatória intestinal [7].

Objetivo do estudo O objetivo do estudo é comparar os achados de imagem do p-CLE em conjunto com a endoscopia I-scan com escore de atividade e diagnóstico histológico.

Pacientes e métodos O estudo incluirá prospectivamente pacientes com colite ulcerosa ativa ou doença de Crohn que atendam aos critérios de inclusão e exclusão. Todos os pacientes serão examinados por colonoscopia convencional, seguida de exame I-scan e p-CLE, e amostras de biópsia serão coletadas para cada segmento do cólon. Em seguida, será calculada a correlação entre histologia como "padrão ouro", escore de atividade (escore de Mayo para colite ulcerativa, respectivamente Índice de Atividade da Doença de Crohn para doença de Crohn) e achados de imagem para ambas as áreas patológicas e normais.

Critério de inclusão

• Idade > 18 anos, masculino ou feminino
• Pacientes diagnosticados com colite ulcerativa ativa (escore MAYO >3) ou doença de Crohn (escore CDAI >150), onde existe indicação de tratamento e colonoscopia. Recém-diagnosticados, bem como pacientes já em terapia oral com 5-ASA, podem ser incluídos.
• Consentimento informado assinado para colonoscopia e exame p-CLE Critérios de exclusão
• Falha em fornecer consentimento informado
• Pacientes com contra-indicação para colonoscopia
• Alergia conhecida à fluoresceína
• Pacientes grávidas ou amamentando
• Terapia imunossupressora sistêmica em andamento com prednisolona, ​​azatioprina ou agentes biológicos.

Os dados coletados para cada participante incluirão:

• Dados pessoais (nome, sobrenome, idade, sexo)
• Resultados de investigações anteriores
• Avaliação clínica (frequência de evacuações, sangramento retal, febre, dor abdominal, manifestação extra intestinal, massa abdominal) e hemograma para calculadora de índice de atividade (escore de Mayo para colite ulcerativa, respectivamente escore CDAI para doença de Crohn)
• Achados endoscópicos
• Achados histológicos e imunohistoquímicos
• Resultados da análise molecular

exames de imagem

• Todos os pacientes serão examinados por colonoscopia I-scan e o grau e a distribuição da inflamação aguda serão avaliados.
• O exame p-CLE seguirá, após a administração intravenosa do agente de contraste (2,5 ml de fluoresceína a 10%), em todos os segmentos do cólon em áreas normais e patológicas.
• Os dados da imagem serão armazenados digitalmente para análise off-line (filme de 10 a 20 segundos para cada área examinada).
• Amostras de biópsia serão retiradas de cada área examinada por p-CLE para análise histológica, imuno-histoquímica e molecular.

O material biológico coletado durante o estudo (que incluirá um ml de sangue total e biópsias de tecido normal e de áreas modificadas de 2 a 3 mm cada) será congelado e armazenado. Quando o número esperado de participantes for atingido, as amostras serão submetidas a estudos moleculares para avaliação dos marcadores de angiogênese conforme detalhado mais adiante no protocolo. Os materiais biológicos serão armazenados e analisados ​​durante um tempo estimado de 18 meses a partir do início do ensaio. Após a conclusão do estudo os biomateriais serão descartados.

Amostras biológicas para testes moleculares:

• Amostras de sangue serão coletadas antes dos procedimentos de imagem

  1. Para extração de DNA, 2-5 ml de sangue podem ser coletados em tubos contendo EDTA e armazenados a 4°C por um dia ou transferidos para freezer a -80°C para armazenamento mais longo
  2. Para a extração de RNA, 2-5 ml de sangue devem ser coletados em tubos PAX e mantidos no máximo 2 horas em temperatura ambiente e depois transferidos para freezer a -80°C para armazenamento mais longo
• Amostras de tecido:

Possíveis métodos para estabilizar amostras de tecido para posterior análise molecular (RNA/DNA/proteína):

1. 0,3-0,5 cm de tecido é armazenado imediatamente em um tubo contendo solução de RNAlater por aproximadamente 24 horas a 4°C; depois disso, a solução de RNAlater é retirada do tubo (em condições estéreis) e a amostra é congelada a -80°C até a extração do RNA/DNA.
2. 0,3-0,5 cm de tecido é armazenado imediatamente em um tubo criogênico vazio e jogado em um recipiente que contém nitrogênio líquido ou gelo seco com metanol.

Medidas de resultados primários:

• Os achados do p-CLE são registrados e comparados com os achados da colonoscopia convencional e colonoscopia I-scan.
• Os achados da colonoscopia p-CLE e I-scan são comparados com a avaliação patológica de amostras de tecido.

Medidas de resultados secundários:

• Efeito da terapia, com base nos resultados da colonoscopia convencional, I-scan e p-CLE
• Registrando o tempo do procedimento.
• Registrando possíveis complicações

Riscos e efeitos colaterais Complicações podem ocorrer durante a colonoscopia, mas são raras. Estes consistem em sangramento no local da biópsia que geralmente é mínimo, autolimitado e raramente requer acompanhamento. A perfuração do intestino é extremamente rara. O perfil de segurança do agente de contraste (fluoresceína) mostrou uma incidência muito baixa de efeitos colaterais. Não é nefrotóxico e a incidência de hipersensibilidade ou eventos alérgicos graves é baixa. A fluoresceína é aprovada para uso clínico nos países da UE.