I-Scanin ja konfokaalisen laserendomikroskopian arvo kroonisen tulehduksellisen suolistosairauden arvioinnissa (I-Scan-CLE-IBD)

I-Scanin ja Confocal Laser Endomicroscopyn arvo kroonisen tulehduksellisen suolistosairauden arvioinnissa

Tausta Kolonoskopialla on tärkeä rooli kroonisen tulehduksellisen suolistosairauden (IBD) diagnosoinnissa, aktiivisuuden arvioinnissa, hoidon jatkamisessa ja vasteessa. Perinteinen tutkimus aliarvioi taudin laajuuden ja aktiivisuuden histologiaan verrattuna, joten limakalvobiopsia on kriittinen osa näiden potilaiden endoskooppista tutkimusta. Useiden biopsioiden ottaminen on aikaa vievää, siihen liittyy pieni, mutta ei merkityksetön riski sekundaariseen verenvuotoon, ja se viivästää diagnoosia odottaessaan histologista analyysiä.

Konfokaalinen laserendomikroskopia on noussut viime vuosina uudeksi tekniikaksi, joka todella mahdollistaa in vivo mikroskooppisen analyysin käynnissä olevan endoskopian aikana. Endomikroskopia voidaan suorittaa joko erillisellä endoskoopilla (eCLE) tai minianturipohjaisilla järjestelmillä (pCLE) [1]. Se on varjoainepohjainen tekniikka, ja laajimmin käytetty aine on suonensisäisesti annettava fluoreseiini [2]. Koettimeen perustuva endomikroskopiajärjestelmä koostuu joustavasta katetrianturista, joka edustaa optisten kuitujen nippua, joka on yhdistetty mikroobjektiiviin, laserskannausyksiköstä ja ohjaus- ja hankintaohjelmistosta (Cellvizio; Mauna Kea Technology, Pariisi, Ranska). Joustavat konfokaaliset minikoettimet on erityisesti suunniteltu kuljetettavaksi tavallisten endoskooppien, sappikatetrien tai kolangioskooppien työkanavien läpi, joten pCLE-järjestelmä voidaan helposti integroida mihin tahansa endoskopiayksikköön. Tekniikan periaate perustuu siihen, että määritellyn aallonpituuden omaava lasersäde kohdistetaan kohdekudokseen ja uudelleen siepattu signaali näytetään "optisina biopsiina" yhdessä vaakatasossa.

CLE:n mahdollista roolia on tutkittu sekä ylemmän että alemman maha-suolikanavan patologiassa, mikä osoittaa hyvää tarkkuutta lopullisen histopatologisen diagnoosin ennustamisessa, joka perustuu kudos- ja verisuonimallien välittömään arviointiin [3]. Pienen skannausalueensa vuoksi tätä tekniikkaa voidaan parhaiten käyttää yhdessä muiden "punalippu"-tekniikoiden kanssa seulomaan limakalvosta kiinnostavia alueita, jotka voidaan sitten tutkia CLE:llä histologista diagnoosia varten [4].

I-scan-tekniikka (Pentax, Tokio, Japani) on uusi kuvatehostettu endoskooppinen tekniikka, joka koostuu kolmentyyppisistä algoritmeista: pinnan parannus (SE; rakenteen parantaminen reunojen tunnistamisen avulla), kontrastin parantaminen (CE; tehostaminen) masentuneet alueet ja rakenteelliset erot matalatiheyksisten alueiden värillisen esittelyn avulla) ja sävyn parantaminen (TE; yksittäisille elimille räätälöity tehostus muokkaamalla kunkin pikselin RGB-komponenttien yhdistelmää) [5,6]. Kuten kapeakaistaisella kuvantamisella, i-scanilla voidaan saavuttaa virtuaalinen kromoendoskopia, mutta toistaiseksi ei ole tehty tutkimuksia tämän tekniikan roolin määrittämiseksi tulehduksellisen suolistosairauden aktiivisuuden arvioinnissa [7].

Tutkimuksen tarkoitus Tutkimuksen tavoitteena on verrata p-CLE:n kuvantamislöydöksiä I-scan endoskopian yhteydessä aktiivisuuspisteisiin ja histologiseen diagnoosiin.

Potilaat ja menetelmät Tutkimukseen otetaan prospektiivisesti mukaan potilaat, joilla on aktiivinen haavainen paksusuolitulehdus tai Crohnin tauti ja jotka täyttävät mukaanotto- ja poissulkemiskriteerit. Kaikki potilaat tutkitaan tavanomaisella kolonoskopialla, jota seuraa I-scan-tutkimus ja p-CLE, ja biopsianäytteet otetaan jokaisesta paksusuolen segmentistä. Sitten korrelaatio histologian "kultastandardina", aktiivisuuspisteet (Mayo-pisteet haavaiselle paksusuolitulehdukselle, vastaavasti Crohnin taudin aktiivisuusindeksi Crohnin taudille) ja kuvantamislöydösten välillä lasketaan sekä patologisille että normaaleille alueille.

Sisällyttämiskriteerit

• Ikä > 18 vuotta, mies tai nainen
• Potilaat, joilla on diagnosoitu aktiivinen haavainen paksusuolitulehdus (MAYO-pistemäärä > 3) tai Crohnin tauti (CDAI-pistemäärä > 150), jolloin hoitoon ja kolonoskopiaan on aihetta. Vastadiagnoosit sekä potilaat, jotka ovat jo saaneet suun kautta annettavaa 5-ASA-hoitoa, voidaan ottaa mukaan.
• Allekirjoitettu tietoinen suostumus kolonoskopiaan ja p-CLE-tutkimukseen Poissulkemiskriteerit
• Tietoisen suostumuksen jättäminen
• Potilaat, joilla on vasta-aihe kolonoskopiaan
• Tunnettu allergia fluoreseiinille
• Raskaana olevat tai imettävät potilaat
• Meneillään oleva systeeminen immunosuppressiohoito prednisolonilla, atsatiopriinilla tai biologisilla aineilla.

Jokaisesta osallistujasta kerätyt tiedot sisältävät:

• Henkilötiedot (nimi, sukunimi, ikä, sukupuoli)
• Aiempien tutkimusten tulokset
• Kliininen arviointi (ulosteiden tiheys, peräsuolen verenvuoto, kuume, vatsakipu, suolen ulkopuolinen ilmentymä, vatsan massa) ja verenkuva aktiivisuusindeksin laskimelle (Mayo-pisteet haavaiselle paksusuolitulehdukselle, vastaavasti CDAI-pisteet Crohnin taudille)
• Endoskooppiset löydökset
• Histologiset ja immunohistokemialliset löydökset
• Molekyylianalyysin löydökset

Kuvantamistestit

• Kaikki potilaat tutkitaan I-scan kolonoskopialla ja akuutin tulehduksen aste ja jakautuminen arvioidaan.
• Varjoaineen (2,5 ml fluoreseiini 10 %) laskimonsisäisen annon jälkeen seuraa p-CLE-tutkimus paksusuolen jokaisessa segmentissä sekä normaaleissa että patologisissa alueilla.
• Kuvatiedot tallennetaan digitaalisesti offline-analyysiä varten (10-20 sekunnin elokuva jokaiselta tutkittavalta alueelta).
• Biopsianäytteet otetaan jokaiselta p-CLE:llä tutkitulta alueelta histologista, immunohistokemiallista ja molekyylianalyysiä varten.

Tutkimuksen aikana kerätty biologinen materiaali (tämä sisältää yhden ml:n kokoverta ja kudosbiopsiaa normaalista kudoksesta ja 2–3 mm:n muunnetuilta alueilta) pakastetaan ja varastoidaan. Kun odotettu osallistujamäärä saavutetaan, näytteille tehdään molekyylitutkimukset angiogeneesimarkkerien arvioimiseksi, kuten protokollassa on tarkemmin kuvattu. Biologisia materiaaleja varastoidaan ja analysoidaan arviolta 18 kuukauden ajan kokeen alkamisesta. Tutkimuksen päätyttyä biomateriaalit hävitetään.

Biologiset näytteet molekyylitestejä varten:

• Verinäytteet otetaan ennen kuvantamista

  1. DNA-uutosta varten 2-5 ml verta voidaan kerätä EDTA:ta sisältäviin altaisiin ja säilyttää 4 °C:ssa vuorokauden ajan tai siirtää -80 °C pakastimeen pidempään säilytystä varten.
  2. RNA-uuttoa varten 2-5 ml verta on kerättävä PAX-astioihin ja pidettävä enintään 2 tuntia huoneenlämmössä ja siirrettävä sitten -80°C pakastimeen pidempään säilytystä varten.
• Kudosnäytteet:

Mahdollisia menetelmiä kudosnäytteiden stabilointiin myöhempää molekyylianalyysiä varten (RNA/DNA/proteiini):

1. 0,3-0,5 cm kudosta säilytetään välittömästi putkessa, joka sisältää RNAlater-liuosta noin 24 tunnin ajan 4 °C:ssa; tämän jälkeen RNAlater-liuos otetaan pois putkesta (steriileissä olosuhteissa) ja näyte jäädytetään -80 °C:ssa RNA/DNA-uuttoon asti.
2. 0,3-0,5 cm kudosta varastoidaan välittömästi tyhjään kryogeeniseen putkeen ja heitetään säiliöön, joka sisältää nestemäistä typpeä tai kuivajäätä metanolin kanssa.

Ensisijaiset tulostoimenpiteet:

• p-CLE-löydökset kirjataan ja niitä verrataan tavanomaisen kolonoskopian ja I-scan kolonoskopian löydöksiin.
• p-CLE- ja I-scan-kolonoskopian löydöksiä verrataan kudosnäytteiden patologiseen arviointiin.

Toissijaiset tulostoimenpiteet:

• Hoidon vaikutus, joka perustuu perinteisen kolonoskopian, I-skannauksen ja p-CLE:n tuloksiin
• Toimenpiteen ilmoittautumisaika.
• Mahdollisten komplikaatioiden rekisteröinti

Riskit ja sivuvaikutukset Kolonoskopian aikana saattaa ilmetä komplikaatioita, mutta ne ovat harvinaisia. Nämä koostuvat verenvuodosta biopsiakohdassa, joka on yleensä vähäistä, itsestään rajoittuvaa ja vaatii harvoin seurantaa. Suolen perforaatio on erittäin harvinaista. Varjoaineen (fluoreseiinin) turvallisuusprofiili osoitti erittäin vähäistä sivuvaikutusten ilmaantuvuutta. Se ei ole munuaistoksinen ja yliherkkyysoireiden tai vakavien allergisten tapahtumien ilmaantuvuus on pieni. Fluoreskeiini on hyväksytty kliiniseen käyttöön EU-maissa.