Значение I-Scan и конфокальной лазерной эндомикроскопии для оценки хронического воспалительного заболевания кишечника (I-Scan-CLE-IBD)

Значение I-Scan и конфокальной лазерной эндомикроскопии для оценки хронического воспалительного заболевания кишечника

Предпосылки Колоноскопия играет важную роль в диагностике, оценке активности, расширении и ответе на терапию при хроническом воспалительном заболевании кишечника (ВЗК). Обычное обследование недооценивает степень и активность заболевания по сравнению с гистологией, поэтому биопсия слизистой оболочки является важным компонентом эндоскопического исследования этих пациентов. Взятие нескольких биопсий занимает много времени, сопряжено с низким, но не пренебрежимо малым риском вторичного кровотечения и вызывает задержку в постановке диагноза в ожидании гистологического анализа.

Конфокальная лазерная эндомикроскопия появилась в последние годы как новый метод, который фактически позволяет проводить микроскопический анализ in vivo во время текущей эндоскопии. Эндомикроскопию можно выполнять либо с помощью специального эндоскопа (eCLE), либо с помощью систем на основе минизондов (pCLE) [1]. Это методика, основанная на контрастировании, наиболее широко используемым агентом является внутривенно вводимый флуоресцеин [2]. Система эндомикроскопии на основе зонда состоит из гибкого катетерного зонда, представляющего собой пучок оптических волокон, соединенных с микрообъективом, блока лазерного сканирования и программного обеспечения для управления и сбора данных (Cellvizio; Mauna Kea Technology, Париж, Франция). Гибкие конфокальные минизонды были специально разработаны для прохождения через рабочие каналы стандартных эндоскопов, билиарных катетеров или холангиоскопов, поэтому систему pCLE можно легко интегрировать в любой эндоскопический блок. Принцип метода основан на том, что лазерный луч определенной длины волны фокусируется на ткани-мишени, а повторно захваченный сигнал отображается в виде «оптических биопсий» в одной горизонтальной плоскости.

Потенциальная роль CLE была изучена при патологии как верхних, так и нижних отделов желудочно-кишечного тракта, показывая хорошую точность для прогнозирования окончательного гистопатологического диагноза на основе немедленной оценки тканевых и сосудистых структур [3]. Из-за малой площади сканирования эту технологию лучше всего использовать в сочетании с другими «красными флажками» для скрининга слизистой оболочки на наличие областей интереса, которые затем можно исследовать с помощью CLE для гистологического диагноза [4].

Технология I-scan (Pentax, Токио, Япония) — это новая эндоскопическая техника с улучшенным изображением, состоящая из трех типов алгоритмов: улучшение поверхности (SE; улучшение структуры за счет распознавания краев), усиление контраста (CE; усиление вдавленные области и различия в структуре за счет цветного представления областей с низкой плотностью) и усиление тона (TE; усиление, адаптированное к отдельным органам за счет модификации комбинации компонентов RGB для каждого пикселя) [5,6]. Подобно узкоспектральной визуализации i-scan может обеспечить виртуальную хромоэндоскопию, но до сих пор не проводилось исследований, определяющих роль этой технологии в оценке активности при воспалительных заболеваниях кишечника [7].

Цель исследования Целью исследования является сравнение результатов визуализации p-CLE в сочетании с I-сканирующей эндоскопией с оценкой активности и гистологическим диагнозом.

Пациенты и методы. Проспективно в исследование будут включены пациенты с активным язвенным колитом или болезнью Крона, отвечающие критериям включения и исключения. Все пациенты будут обследованы с помощью обычной колоноскопии с последующим I-сканированием и p-CLE, а образцы биопсии будут взяты для каждого сегмента толстой кишки. Затем будет рассчитана корреляция между гистологией как «золотым стандартом», оценкой активности (шкала Мейо для язвенного колита, соответственно индекс активности болезни Крона для болезни Крона) и результатами визуализации как для патологических, так и для нормальных областей.

Критерии включения

• Возраст > 18 лет, мужчина или женщина
• Пациенты с диагнозом активный язвенный колит (оценка MAYO > 3) или болезнь Крона (оценка CDAI > 150), у которых есть показания для лечения и колоноскопии. Могут быть включены вновь диагностированные пациенты, а также пациенты, уже получающие пероральную терапию 5-АСК.
• Подписанное информированное согласие на колоноскопию и исследование p-CLE Критерии исключения
• Непредоставление информированного согласия
• Пациенты с противопоказаниями к колоноскопии
• Известная аллергия на флуоресцеин
• Беременные или кормящие пациенты
• Постоянная системная иммуносупрессивная терапия преднизолоном, азатиоприном или биологическими препаратами.

Данные, собранные для каждого участника, будут включать:

• Персональные данные (имя, фамилия, возраст, пол)
• Результаты предыдущих исследований
• Клиническая оценка (частота стула, ректальное кровотечение, лихорадка, боль в животе, внекишечные проявления, образование в брюшной полости) и анализ крови для калькулятора индекса активности (по шкале Мейо для язвенного колита, соответственно по шкале CDAI для болезни Крона)
• Эндоскопические данные
• Гистологические и иммуногистохимические данные
• Результаты молекулярного анализа

Визуальные тесты

• Все пациенты будут обследованы с помощью колоноскопии I-scan, и будет оценена степень и распространение острого воспаления.
• После внутривенного введения контрастного вещества (2,5 мл 10% флуоресцеина) последует исследование p-CLE в каждом сегменте толстой кишки как в нормальных, так и в патологических областях.
• Данные изображения будут храниться в цифровом виде для автономного анализа (10-20-секундный видеоролик для каждой исследованной области).
• Образцы биопсии будут взяты из каждой области, исследованной с помощью p-CLE, для гистологического, иммуногистохимического и молекулярного анализа.

Биологический материал, собранный в ходе исследования (сюда будет входить один мл цельной крови и биоптатов тканей из нормальной ткани и из измененных участков размером 2–3 мм каждый), будет заморожен и сохранен. Когда будет достигнуто ожидаемое количество участников, образцы будут подвергнуты молекулярным исследованиям для оценки маркеров ангиогенеза, как подробно описано далее в протоколе. Биологические материалы будут храниться и анализироваться в течение примерно 18 месяцев с начала испытания. После завершения исследования биоматериалы будут утилизированы.

Биологические образцы для молекулярных тестов:

• Образцы крови будут собираться перед процедурами визуализации

  1. Для выделения ДНК можно собрать 2-5 мл крови в пробирки с ЭДТА и хранить при 4°C в течение дня или перенести в морозильную камеру при -80°C для более длительного хранения.
  2. Для выделения РНК необходимо собрать 2-5 мл крови в пробирки PAX и выдержать не более 2 часов при комнатной температуре, а затем перенести в морозильную камеру -80°C для более длительного хранения.
• Образцы тканей:

Возможные методы стабилизации образцов тканей для дальнейшего молекулярного анализа (РНК/ДНК/белок):

1. 0,3-0,5 см ткани немедленно хранят в пробирке с раствором RNAlater в течение примерно 24 часов при 4°С; после этого раствор RNAlater вынимают из пробирки (в стерильных условиях) и образец замораживают при -80°C до выделения РНК/ДНК.
2. 0,3-0,5 см ткани сразу же хранят в пустой криогенной пробирке и бросают в емкость, содержащую жидкий азот или сухой лед с метанолом.

Первичные итоговые показатели:

• Результаты p-CLE записываются и сравниваются с результатами обычной колоноскопии и колоноскопии с I-сканированием.
• Результаты колоноскопии p-CLE и I-scan сравниваются с патологической оценкой образцов тканей.

Вторичные итоговые показатели:

• Эффект терапии, основанный на результатах традиционной колоноскопии, I-scan и p-CLE
• Регистрация времени процедуры.
• Регистрация возможных осложнений

Риски и побочные эффекты Во время колоноскопии могут возникать осложнения, но они встречаются редко. Они состоят из кровотечения в месте биопсии, которое обычно минимально, самокупируется и редко требует последующего наблюдения. Перфорация кишечника встречается крайне редко. Профиль безопасности контрастного вещества (флуоресцеин) показал очень низкую частоту побочных эффектов. Он не нефротоксичен, и частота гиперчувствительности или тяжелых аллергических явлений низкая. Флуоресцеин одобрен для клинического применения в странах ЕС.