Il valore dell'I-Scan e dell'endomicroscopia laser confocale per la valutazione della malattia infiammatoria cronica intestinale (I-Scan-CLE-IBD)

Il valore dell'I-Scan e dell'endomicroscopia laser confocale per la valutazione della malattia infiammatoria cronica intestinale

Contesto La colonscopia svolge un ruolo importante nella diagnosi, valutazione dell'attività, estensione e risposta alla terapia nella malattia infiammatoria cronica intestinale (IBD). L'esame convenzionale sottostima l'estensione e l'attività della malattia rispetto all'istologia, pertanto la biopsia della mucosa è una componente critica dell'esame endoscopico di questi pazienti. L'esecuzione di più biopsie richiede tempo, comporta un rischio basso ma non trascurabile di emorragia secondaria e causa un ritardo nella diagnosi, in attesa dell'analisi istologica.

L'endomicroscopia laser confocale è emersa negli ultimi anni come una nuova tecnica che consente effettivamente l'analisi microscopica in vivo durante l'endoscopia in corso. L'endomicroscopia può essere eseguita con un endoscopio dedicato (eCLE) o con sistemi basati su miniprobe (pCLE) [1]. Si tratta di una tecnica basata sul contrasto, l'agente più utilizzato è la fluoresceina somministrata per via endovenosa [2]. Il sistema di endomicroscopia basato su sonda è costituito da una sonda di catetere flessibile che rappresenta un fascio di fibre ottiche collegate a un micro-obiettivo, un'unità di scansione laser e il software di controllo e acquisizione (Cellvizio; Mauna Kea Technology, Parigi, Francia). Le minisonde confocali flessibili sono state specificamente progettate per essere passate attraverso i canali di lavoro di endoscopi standard, cateteri biliari o colangioscopi e quindi il sistema pCLE può essere facilmente integrato in qualsiasi unità endoscopica. Il principio della tecnica si basa su un raggio laser di lunghezza d'onda definita focalizzato verso il tessuto mirato e il segnale recuperato viene visualizzato come "biopsie ottiche" su un unico piano orizzontale.

Il ruolo potenziale di CLE è stato esplorato nella patologia del tratto gastrointestinale superiore e inferiore, mostrando una buona accuratezza per predire la diagnosi istopatologica finale basata sulla valutazione immediata dei pattern tissutali e vascolari [3]. A causa della sua minuscola area di scansione, questa tecnologia è utilizzata al meglio in combinazione con altre tecniche "red-flag" per schermare la mucosa alla ricerca di aree di interesse, che possono quindi essere esaminate da CLE per una diagnosi istologica [4].

La tecnologia I-scan (Pentax, Tokyo, Giappone) è una nuova tecnica endoscopica con miglioramento delle immagini, costituita da tre tipi di algoritmi: miglioramento della superficie (SE; miglioramento della struttura attraverso il riconoscimento dei bordi), miglioramento del contrasto (CE; miglioramento della aree depresse e differenze di struttura attraverso la presentazione colorata di aree a bassa densità) e miglioramento del tono (TE; miglioramento adattato ai singoli organi attraverso la modifica della combinazione di componenti RGB per ciascun pixel) [5,6]. Come l'imaging a banda stretta, i-scan può ottenere una cromoendoscopia virtuale, ma fino ad ora non sono stati condotti studi per determinare il ruolo di questa tecnologia nella valutazione dell'attività nella malattia infiammatoria intestinale [7].

Scopo dello studio Lo scopo dello studio è confrontare i risultati di imaging di p-CLE in combinazione con l'endoscopia I-scan con il punteggio di attività e la diagnosi istologica.

Pazienti e metodi Lo studio includerà prospetticamente pazienti con colite ulcerosa attiva o morbo di Crohn che soddisfano i criteri di inclusione ed esclusione. Tutti i pazienti saranno esaminati mediante colonscopia convenzionale, seguita da esame I-scan e p-CLE, e verranno prelevati campioni bioptici per ciascun segmento del colon. Quindi, verrà calcolata la correlazione tra istologia come "gold standard", punteggio di attività (punteggio Mayo per la colite ulcerosa, rispettivamente indice di attività della malattia di Crohn per la malattia di Crohn) e risultati di imaging per entrambe le aree patologiche e normali.

Criterio di inclusione

• Età > 18 anni, maschio o femmina
• Pazienti con diagnosi di colite ulcerosa attiva (punteggio MAYO >3) o morbo di Crohn (punteggio CDAI >150), per i quali esiste un'indicazione per il trattamento e la colonscopia. Possono essere inclusi pazienti di nuova diagnosi così come pazienti già in terapia orale con 5-ASA.
• Consenso informato firmato per colonscopia ed esame p-CLE Criteri di esclusione
• Mancato rilascio del consenso informato
• Pazienti con controindicazione alla colonscopia
• Allergia nota alla fluoresceina
• Pazienti in gravidanza o in allattamento
• Terapia immunosoppressiva sistemica in corso con prednisolone, azatioprina o agenti biologici.

I dati raccolti per ciascun partecipante includeranno:

• Dati anagrafici (nome, cognome, età, sesso)
• Risultati di indagini precedenti
• Valutazione clinica (frequenza delle feci, sanguinamento rettale, febbre, dolore addominale, manifestazione extra intestinale, massa addominale) ed emocromo per il calcolatore dell'indice di attività (punteggio Mayo per la colite ulcerosa, rispettivamente punteggio CDAI per la malattia di Crohn)
• Reperti endoscopici
• Reperti istologici e immunoistochimici
• Risultati dell'analisi molecolare

Prove di imaging

• Tutti i pazienti saranno esaminati mediante colonscopia I-scan e saranno valutati il ​​grado e la distribuzione dell'infiammazione acuta.
• Seguirà esame p-CLE, dopo somministrazione endovenosa del mezzo di contrasto (2,5 ml fluoresceina 10%), in ogni segmento del colon sia in area normale che patologica.
• I dati delle immagini verranno archiviati digitalmente per l'analisi offline (filmato di 10-20 secondi per ogni area esaminata).
• Campioni bioptici saranno prelevati da ciascuna area esaminata mediante p-CLE per l'analisi istologica, immunoistochimica e molecolare.

Il materiale biologico raccolto durante lo studio (questo includerà un ml di sangue intero e biopsie tissutali da tessuto normale e da aree modificate da 2 a 3 mm ciascuna) sarà congelato e conservato. Quando viene raggiunto il numero previsto di partecipanti, i campioni saranno sottoposti a studi molecolari per valutare i marcatori dell'angiogenesi come dettagliato più avanti nel protocollo. I materiali biologici saranno conservati e analizzati per un tempo stimato di 18 mesi dall'inizio della sperimentazione. Dopo il completamento dello studio i biomateriali saranno smaltiti.

Campioni biologici per test molecolari:

• I campioni di sangue verranno raccolti prima delle procedure di imaging

  1. Per l'estrazione del DNA è possibile raccogliere 2-5 ml di sangue in vaschette contenenti EDTA e conservarle a 4°C per un giorno o trasferirle in congelatore a -80°C per una conservazione più lunga
  2. Per l'estrazione dell'RNA, 2-5 ml di sangue devono essere raccolti in vaschette PAX e conservati per un massimo di 2 ore a temperatura ambiente e quindi trasferiti in congelatore a -80°C per una conservazione più lunga
• Campioni di tessuto:

Possibili metodi per stabilizzare campioni di tessuto per ulteriori analisi molecolari (RNA/DNA/proteine):

1. 0,3-0,5 cm di tessuto vengono conservati immediatamente in una provetta contenente RNAlater Solution per circa 24 ore a 4°C; successivamente la soluzione di RNAlater viene estratta dalla provetta (in condizioni sterili) e il campione viene congelato a -80°C fino all'estrazione di RNA/DNA.
2. 0,3-0,5 cm di tessuto vengono immagazzinati immediatamente in un tubo criogenico vuoto e gettati in un contenitore contenente azoto liquido o ghiaccio secco con metanolo.

Misure di risultato primarie:

• I risultati p-CLE vengono registrati e confrontati con i risultati della colonscopia convenzionale e della colonscopia I-scan.
• I risultati della colonscopia p-CLE e I-scan vengono confrontati con la valutazione patologica dei campioni di tessuto.

Misure di risultato secondarie:

• Effetto della terapia, basato sui risultati della colonscopia convenzionale, I-scan e p-CLE
• Orario di registrazione della procedura.
• Registrazione di possibili complicazioni

Rischi ed effetti collaterali Durante la colonscopia possono verificarsi complicazioni, ma sono rare. Questi consistono in sanguinamento nel sito della biopsia che di solito è minimo, autolimitato e raramente richiede un follow-up. La perforazione dell'intestino è estremamente rara. Il profilo di sicurezza del mezzo di contrasto (fluoresceina) ha mostrato un'incidenza molto bassa di effetti collaterali. Non è nefrotossico e l'incidenza di ipersensibilità o eventi allergici gravi è bassa. La fluoresceina è approvata per l'uso clinico nei paesi dell'UE.