El valor de I-Scan y la endomicroscopia láser confocal para la evaluación de la enfermedad inflamatoria intestinal crónica (I-Scan-CLE-IBD)

El valor de I-Scan y la endomicroscopia láser confocal para la evaluación de la enfermedad inflamatoria intestinal crónica

Antecedentes La colonoscopia juega un papel importante en el diagnóstico, la evaluación de la actividad, la extensión y la respuesta al tratamiento en la enfermedad inflamatoria intestinal crónica (EII). El examen convencional subestima la extensión y la actividad de la enfermedad en comparación con la histología, por lo tanto, la biopsia de la mucosa es un componente crítico del examen endoscópico de estos pacientes. La toma de múltiples biopsias requiere mucho tiempo, conlleva un riesgo bajo pero no despreciable de hemorragia secundaria y provoca un retraso en el diagnóstico, mientras se espera el análisis histológico.

La endomicroscopia láser confocal ha surgido en los últimos años como una técnica novedosa que en realidad permite el análisis microscópico in vivo durante la endoscopia en curso. La endomicroscopia se puede realizar con un endoscopio dedicado (eCLE) o con sistemas basados ​​en minisonda (pCLE) [1]. Es una técnica basada en contraste, siendo el agente más utilizado la fluoresceína administrada por vía intravenosa [2]. El sistema de endomicroscopia basado en sonda consta de una sonda de catéter flexible que representa un haz de fibras ópticas unidas a un microobjetivo, una unidad de escaneo láser y el software de control y adquisición (Cellvizio; Mauna Kea Technology, París, Francia). Las minisondas confocales flexibles se diseñaron específicamente para pasar a través de los canales de trabajo de endoscopios estándar, catéteres biliares o colangioscopios y, por lo tanto, el sistema pCLE se puede integrar fácilmente en cualquier unidad de endoscopia. El principio de la técnica se basa en un rayo láser de longitud de onda definida que se enfoca hacia el tejido objetivo y la señal recapturada se muestra como "biopsias ópticas" en un único plano horizontal.

El papel potencial de CLE se ha explorado en la patología del tracto gastrointestinal superior e inferior, mostrando una buena precisión para predecir el diagnóstico histopatológico final basado en la evaluación inmediata de los patrones tisulares y vasculares [3]. Debido a su área de escaneo diminuta, esta tecnología se utiliza mejor junto con otras técnicas de "bandera roja" para detectar áreas de interés en la mucosa, que luego pueden ser examinadas por CLE para un diagnóstico histológico [4].

La tecnología I-scan (Pentax, Tokio, Japón) es una nueva técnica endoscópica de imagen mejorada, que consta de tres tipos de algoritmos: mejora de la superficie (SE; mejora de la estructura a través del reconocimiento de los bordes), mejora del contraste (CE; mejora de áreas deprimidas y diferencias en la estructura a través de la presentación en color de las áreas de baja densidad) y mejora del tono (TE; mejora adaptada a órganos individuales mediante la modificación de la combinación de componentes RGB para cada píxel) [5,6]. Al igual que las imágenes de banda estrecha, i-scan puede lograr una cromoendoscopia virtual, pero hasta ahora no se han realizado estudios para determinar el papel de esta tecnología en la evaluación de la actividad en la enfermedad inflamatoria intestinal [7].

Objetivo del estudio El objetivo del estudio es comparar los hallazgos de imágenes de p-CLE junto con la endoscopia I-scan con puntuación de actividad y diagnóstico histológico.

Pacientes y métodos El estudio incluirá prospectivamente pacientes con colitis ulcerosa activa o enfermedad de Crohn que cumplan los criterios de inclusión y exclusión. Todos los pacientes serán examinados mediante una colonoscopia convencional, seguida de un examen I-scan y p-CLE, y se tomarán muestras de biopsia para cada segmento del colon. Luego, se calculará la correlación entre la histología como "estándar de oro", la puntuación de actividad (puntuación de Mayo para la colitis ulcerosa, índice de actividad de la enfermedad de Crohn respectivamente para la enfermedad de Crohn) y los hallazgos de imágenes para las áreas patológicas y normales.

Criterios de inclusión

• Edad > 18 años, hombre o mujer
• Pacientes diagnosticados de colitis ulcerosa activa (puntuación MAYO >3) o enfermedad de Crohn (puntuación CDAI >150), en los que exista indicación de tratamiento y colonoscopia. Pueden incluirse pacientes recién diagnosticados, así como pacientes que ya reciben terapia oral con 5-ASA.
• Consentimiento informado firmado para colonoscopia y examen p-CLE Criterios de exclusión
• Falta de consentimiento informado
• Pacientes con contraindicación para la colonoscopia
• Alergia conocida a la fluoresceína
• Pacientes embarazadas o en período de lactancia
• Terapia inmunosupresora sistémica en curso con prednisolona, ​​azatioprina o agentes biológicos.

Los datos recopilados para cada participante incluirán:

• Datos personales (nombre, apellidos, edad, sexo)
• Resultados de investigaciones previas
• Evaluación clínica (frecuencia de deposiciones, rectorragia, fiebre, dolor abdominal, manifestación extraintestinal, masa abdominal) y hemograma para calculadora de índice de actividad (puntuación de Mayo para colitis ulcerosa, respectivamente puntuación CDAI para enfermedad de Crohn)
• Hallazgos endoscópicos
• Hallazgos histológicos e inmunohistoquímicos
• Resultados del análisis molecular

Pruebas de imagen

• Todos los pacientes serán examinados por colonoscopia I-scan y se evaluará el grado y la distribución de la inflamación aguda.
• Después de la administración endovenosa del medio de contraste (2,5 ml de fluoresceína al 10 %), se realizará un examen de p-CLE en todos los segmentos del colon, tanto en áreas normales como patológicas.
• Los datos de la imagen se almacenarán digitalmente para el análisis fuera de línea (película de 10 a 20 segundos para cada área examinada).
• Se tomarán muestras de biopsia de cada área examinada por p-CLE para análisis histológicos, inmunohistoquímicos y moleculares.

El material biológico recolectado durante el estudio (esto incluirá un ml de sangre total y biopsias de tejido de tejido normal y de áreas modificadas de 2 a 3 mm cada una) se congelará y almacenará. Cuando se alcance el número esperado de participantes, las muestras se someterán a estudios moleculares para evaluar los marcadores de angiogénesis como se detalla más adelante en el protocolo. Los materiales biológicos serán almacenados y analizados durante un tiempo estimado de 18 meses desde el inicio del ensayo. Una vez finalizado el estudio, los biomateriales se eliminarán.

Muestras biológicas para pruebas moleculares:

• Se recolectarán muestras de sangre antes de los procedimientos de imágenes.

  1. Para la extracción de ADN, se pueden recolectar 2-5 ml de sangre en tubos que contengan EDTA y almacenarse a 4 °C durante un día o transferirse a un congelador de -80 °C para un almacenamiento más prolongado.
  2. Para la extracción de ARN, se deben recolectar 2-5 ml de sangre en tubos PAX y mantener un máximo de 2 horas a temperatura ambiente y luego transferir a un congelador de -80°C para un almacenamiento más prolongado.
• Muestras de tejido:

Posibles métodos para estabilizar muestras de tejido para su posterior análisis molecular (ARN/ADN/proteína):

1. Se almacenan inmediatamente 0,3-0,5 cm de tejido en un tubo que contiene Solución RNAlater durante aproximadamente 24 horas a 4°C; después de esto, la solución RNAlater se extrae del tubo (en condiciones estériles) y la muestra se congela a -80 °C hasta la extracción de ARN/ADN.
2. Se almacenan inmediatamente 0,3-0,5 cm de tejido en un tubo criogénico vacío y se echan en un recipiente que contiene nitrógeno líquido o hielo seco con metanol.

Medidas de resultado primarias:

• Los hallazgos de p-CLE se registran y comparan con los hallazgos de la colonoscopia convencional y la colonoscopia I-scan.
• Los resultados de la colonoscopia p-CLE e I-scan se comparan con la evaluación patológica de muestras de tejido.

Medidas de resultado secundarias:

• Efecto de la terapia, basado en los resultados de la colonoscopia convencional, I-scan y p-CLE
• Hora de registro del trámite.
• Registro de posibles complicaciones

Riesgos y efectos secundarios Pueden ocurrir complicaciones durante la colonoscopia, pero son poco frecuentes. Estos consisten en sangrado en el sitio de la biopsia que suele ser mínimo, autolimitado y rara vez requiere seguimiento. La perforación del intestino es extremadamente rara. El perfil de seguridad del agente de contraste (fluoresceína) mostró una incidencia muy baja de efectos secundarios. No es nefrotóxico y la incidencia de hipersensibilidad o eventos alérgicos severos es baja. La fluoresceína está aprobada para uso clínico en países de la UE.