Prognostisk værdi af protein IMP3-ekspression i livmoderhalskræft

Molekylære biomarkører kunne selektivt identificere patienter med et mere ugunstigt klinisk forløb. En af disse biomarkører er IMP3 - insulin-lignende vækstfaktor II mRNA bindende protein.

IGF-gruppen er et komplekst regulatorisk netværk på cellulære og væsentlige niveauer og spiller en fysiologisk nøglerolle i udviklingen af ​​organismen og opretholdelsen af ​​normal cellulær funktion under føtalt og postnatalt liv. Overekspression af vækstfaktorer og deres receptorer er en almindelig begivenhed under carcinogenese. IGF-signalsystemet er under streng kontrol af den normale fysiologiske tilstand, og en afvigelse i denne delikate balance kan være en udløser for mange molekylære hændelser, der fører til udvikling af malignitet. Et medlem af IGF-systemet er det insulinlignende vækstfaktor II-mRNA-bindende protein (IMP), som har vist sig at være en aktivator af IGF-II-translations-mRNA, som således får en dominerende rolle i at kontrollere IGF-II-afhængig celleproliferation.

IMP-proteinfamilien indeholder 3 proteiner (IMP1, IMP2, IMP3). IMP3 udtrykkes normalt i fostervæv under embryogenese. I voksenalderen fremstår det som et onkoprotein, der kun udtrykkes i tumorvæv uden tilstedeværelse i det omgivende (tilstødende) benigne væv. Tidligere in vitro undersøgelser har vist, at IMP3 stimulerer tumorcelleproliferation ved at aktivere IGF II translation og adhæsion og invasion via adhæsionsmolekyler og matrix metalloproteinaser 1.

Resultaterne af nyere forskning i livmoderhalskræft og dens præcancerøse læsioner har knyttet ekspressionen af ​​IMP3-protein til livmoderhalsdysplasi og muligheden for, at svær livmoderhalsdysplasi (CIN III) udvikler sig til planocellulært karcinom. En højere ekspression af IMP3-protein blev fundet i cytoplasmaerne af svær cervikal dysplasi (CIN III) celler og invasive tumorceller sammenlignet med CIN I og CIN II forandringsceller. Følsomheden af ​​IMP3-ekspression i tumorceller var 96%. I præparater, der var IMP3-negative, afslørede ingen yderligere overvågning og behandling planocellulært karcinom. Yderligere analyser indikerede muligheden for at bestemme IMP3-ekspression på første cervikale biopsiprøver hos patienter med HSIL-læsioner som en biomarkør for at påvise en undergruppe af patienter, hos hvem læsionsinvasivitet kan forventes.

Baseret på tidligere undersøgelser er der udviklet et monoklonalt antistof specifikt for IMP3, som med succes anvendes i rutinemæssige immunhistokemiske metoder, der studerer ekspressionen af ​​IMP3-proteiner i forskellige maligniteter. Det er for nylig blevet fundet, at ekspressionen af ​​IMP3-protein er forbundet med et mere aggressivt klinisk forløb og et mindre gunstigt resultat i både gynækologiske og maligne sygdomme i andre organsystemer.

Forskningsspørgsmål

Trods tidligere viden om forebyggelse, opsporing og behandling giver livmoderhalskræft stadig store smerter og dødelighed. Det kliniske forløb har hidtil været overset med hensyn til sygdommens kliniske og patologiske stadie, og ud fra histologiske parametre og sygdommens anatomiske omfang blev der taget stilling til videre behandling og prognose af sygdommen.

Tidligere forskning har kun givet en introduktion til sammenhængen mellem IMP3-proteinekspression og livmoderhalskræft. Der blev fundet en sammenhæng mellem den øgede ekspression af IMP3-protein i gynækologiske og andre kræftformer i kroppen med et dårligere sygdomsudfald.

Denne undersøgelse ville se på ekspressionen af ​​IMP3-protein i livmoderhalspladecellecarcinom med det formål at påvise og forbinde den øgede ekspression af IMP3-protein hos patienter, som forventes at have et ugunstigt klinisk forløb og en dårligere prognose. Kun patienter i FIGO 1A1 og 1B1 sygdomsstadier vil blive observeret, hvilket ikke er blevet gjort i tidligere undersøgelser. På denne måde ville patienter, der ville blive behandlet kirurgisk, blive udpeget, og hvor et dårligere klinisk resultat kunne forudsiges og yderligere behandling kunne planlægges individuelt.

Formål med forskning

Undersøgelsen vil bestemme vigtigheden af ​​immunhistokemisk ekspression af IMP3-protein i livmoderhalskræft pladecellekarcinom som en prognostisk faktor forbundet med højere tumor histologisk grad, højere FIGO-stadie, dårligere forløb og sygdomsudfald.

Undersøg hypotese

Immunhistokemisk ekspression af IMP3-protein i livmoderhalscellepladecellekarcinom var forbundet med dårligere klinisk forløb og sygdomsudfald, kortere sygdomsfri intervalvarighed og dårligere 5-års overlevelsesresultater.

Immunhistokemisk bestemmelse af IMP3-proteinekspression i livmoderhalskræft - som en ny prognostisk faktor

Følgende vil blive udelukket fra undersøgelsen:

• patienter, der har gennemgået præoperativ kemo- og/eller strålebehandling
• patienter med associerede gynækologiske eller andre maligne sygdomme
• patienter med andre histologiske typer af tumorer (adenocarcinom, adenosquamous, neuroendokrine osv.) Forskningen vil blive udført på patohistologiske præparater af operationsmateriale af patienter opereret for livmoderhalskræft i SKB Mostar i ovenstående periode.

Ekspressionen af ​​IMP3-protein vil blive bestemt ved immunhistokemisk metode, og statistisk analyse vil blive brugt til at vurdere sammenhængen mellem ekspression med klinisk og patologisk sygdomsprogression og overlevelsesparametre.

Indsigt i medicinsk dokumentation (patientsygehistorier og medicinsk dokumentation for onkologiske patienter fra Onkologisk og Gynækologisk Klinik SKB Mostar) vil give kliniske data om patienternes alder, klinisk stadium af sygdommen bestemt af FIGO klassifikationskriterier, recidiv/længde af periode uden tegn på sygdom og klinisk udfald.

Forskningsmetoder:

Tumorprøver til analyse vil blive opnået ved 4μ sektioner af arkiverede paraffinblokke.

Muse monoklonale antihumane antistoffer en IMP3 (DAKO) i en fortynding på 1:100 vil blive brugt til immunhistokemisk analyse.

Den immunhistokemiske proces vil begynde med at afvokse vævet først i xylen og derefter rehydrere i alkoholer med stadig lavere koncentrationer. Inkubation i 0,1 % H2O2 (30 minutter ved stuetemperatur) inaktiverede endogen peroxidase. For at påvise antigene steder vil sektionerne blive kogt i citratbuffer, pH 9, i en mikrobølgeovn ved 95°C i 10 minutter og derefter vasket i phosphatbufret saltvand (PBS). Efter afkøling til stuetemperatur blev sektionerne inkuberet med primære antistoffer i 60 minutter. Efter en times inkubation med det primære antistof og vask i PBS vil sekundær detektion med diaminobenzidin (DAB) blive brugt. Et antistof-uafhængigt EnVision Detection Systems Peroxidase (DAB, Rabbit / Mouse K 5007) vil blive brugt til dette formål. Efter en 30-minutters inkubation og vask i PBS vil sektionerne blive farvet med diaminobenzidin (DAB) i 10 minutter ved stuetemperatur og vasket i destilleret vand og farvet med hemalaun. Snitterne vil derefter blive monteret i monteringsmediet og dækket med dækglas. Celler, der reagerede med de passende primære antistoffer, bør have farvede cytoplasmaer.

Resultaterne af immunhistokemisk farvning vil blive fortolket semikvantitativt. Prøver med cytoplasmatisk farvning i mere end 10 % af tumorcellerne vil blive betragtet som positiv ekspression og vil blive klassificeret i 5 kategorier: 0 (1 % -10 % af farvede celler), 1 (11 % -25 %), 2 ( 26 % 50 %), 3 (51 % -75 %) og 4 (76 % -100 %). Intensiteten af ​​IMP3-ekspression vil blive klassificeret som negativ, svag, moderat eller svær.

Sektioner beregnet til negativ kontrol ved immunhistokemisk farvning af hvert antigen vil sammen med andre sektioner blive udsat for den samme procedure, bortset fra at de ikke inkuberes med det primære antistof, men vil være i PBS i løbet af det tidsrum. Kontrolobjektglas fra producenten vil blive brugt som en positiv kontrol.

Prøverne vil blive undersøgt med et Olympus BX40 lysmikroskop (Olympus, Tokyo, Japan).

Total patientoverlevelse (OS) blev defineret som tidsrummet mellem datoen for operationen og datoen for den sidste kliniske kontrol eller død som følge af livmoderhalskræft.

Sygdomsfrit interval (DFS) er defineret som tidsintervallet mellem operationsdatoen og datoen for tilbagefald af sygdommen.

Statistisk databehandling:

De opnåede forskningsresultater vil blive gemt i MS Excel 2007 databasen, til alle statistiske analyser vil SPSS 17 statistiske program blive brugt. Deskriptive statistiske metoder vil blive brugt i dataanalyse. Ikke-parametriske variabler vil blive vist som frekvens og procentdel. Afhængigt af datafordelingen vil de parametriske variable blive vist som det aritmetiske middelværdi og standardafvigelse eller som median- og interkvartilområdet. Datadistributionen vil blive testet af Kolmogorov-Smirnov-testen. En chi-kvadrat-test og Fishers eksakte test vil blive brugt til at teste for forskelle mellem grupper for kategoriske variabler, hvor det er nødvendigt. Student t-test og en-vejs variansanalyse (ANOVA) eller Mann-Whitney U test og Kruskal-Wallis test som ikke-parametriske alternativer i tilfælde af at datafordelingen afviger fra normalen vil blive brugt til at teste forskellen mellem parametriske variable. Der vil blive brugt passende korrelations- og regressionstest til at teste sammenhængen mellem de undersøgte variable. I analysen af ​​overlevelse og sygdomstilbagefald vil Kaplan-Meier metoden og Cox-Mantel log-rank test eller Mantel-Haenszel testen blive brugt afhængigt af de opnåede data. Sandsynlighedsniveauet p <0,005 vil blive taget som statistisk signifikant.