Valeur pronostique de l'expression de la protéine IMP3 dans le cancer du col de l'utérus

Les biomarqueurs moléculaires pourraient identifier sélectivement les patients ayant une évolution clinique plus défavorable. L'un de ces biomarqueurs est IMP3 - protéine de liaison à l'ARNm du facteur de croissance II analogue à l'insuline.

Le groupe IGF est un réseau de régulation complexe aux niveaux cellulaire et substantiel et joue un rôle physiologique clé dans le développement de l'organisme et le maintien d'une fonction cellulaire normale pendant la vie fœtale et postnatale. La surexpression des facteurs de croissance et de leurs récepteurs est un événement courant au cours de la carcinogenèse. Le système de signalisation IGF est sous contrôle strict de l'état physiologique normal et une déviation de cet équilibre délicat peut être le déclencheur de nombreux événements moléculaires conduisant au développement d'une malignité. L'un des membres du système IGF est la protéine de liaison à l'ARNm du facteur de croissance II analogue à l'insuline (IMP) qui s'est avérée être un activateur de l'ARNm de traduction de l'IGF-II, obtenant ainsi un rôle dominant dans le contrôle de la prolifération cellulaire dépendante de l'IGF-II.

La famille des protéines IMP contient 3 protéines (IMP1, IMP2, IMP3). IMP3 est normalement exprimé dans les tissus fœtaux au cours de l'embryogenèse. À l'âge adulte, il apparaît comme une oncoprotéine exprimée uniquement dans les tissus tumoraux sans présence dans le tissu bénin environnant (adjacent). Des études in vitro antérieures ont montré que l'IMP3 stimule la prolifération des cellules tumorales en activant la traduction, l'adhésion et l'invasion de l'IGF II via des molécules d'adhésion et des métalloprotéinases matricielles 1.

Les résultats de recherches récentes sur le cancer du col de l'utérus et ses lésions précancéreuses ont lié l'expression de la protéine IMP3 à la dysplasie cervicale et à la possibilité d'une dysplasie cervicale sévère (CIN III) évoluant vers un carcinome épidermoïde. Une expression plus élevée de la protéine IMP3 a été trouvée dans les cytoplasmes des cellules de dysplasie cervicale sévère (CIN III) et des cellules tumorales invasives par rapport aux cellules de changement CIN I et CIN II. La sensibilité de l'expression d'IMP3 dans les cellules tumorales était de 96 %. Dans les préparations négatives pour IMP3, aucune autre surveillance ni aucun traitement n'a révélé de carcinome épidermoïde. D'autres analyses ont indiqué la possibilité de déterminer l'expression d'IMP3 sur les premiers échantillons de biopsie cervicale chez les patients présentant des lésions HSIL en tant que biomarqueur pour détecter un sous-ensemble de patients chez lesquels on peut s'attendre à une invasion des lésions.

Sur la base d'études antérieures, un anticorps monoclonal spécifique d'IMP3 a été développé et est utilisé avec succès dans des méthodes immunohistochimiques de routine qui étudient l'expression des protéines IMP3 dans diverses tumeurs malignes. Il a été récemment découvert que l'expression de la protéine IMP3 est associée à une évolution clinique plus agressive et à un résultat moins favorable dans les maladies gynécologiques et malignes d'autres systèmes d'organes.

Problèmes de recherche

Malgré les connaissances antérieures en matière de prévention, de détection et de traitement, le cancer du col de l'utérus cause encore beaucoup de douleur et de mortalité. L'évolution clinique a jusqu'à présent été négligée en ce qui concerne le stade clinique et pathologique de la maladie, et sur la base des paramètres histologiques et de l'étendue anatomique de la maladie, une décision a été prise sur le traitement ultérieur et le pronostic de la maladie.

Des recherches antérieures n'ont fourni qu'une introduction à l'association de l'expression de la protéine IMP3 avec le cancer du col de l'utérus. Une association a été trouvée entre l'augmentation de l'expression de la protéine IMP3 dans les cancers gynécologiques et autres dans le corps avec une évolution plus faible de la maladie.

Cette étude examinerait l'expression de la protéine IMP3 dans le carcinome épidermoïde cervical dans le but de détecter et de lier l'expression accrue de la protéine IMP3 chez les patients qui devraient avoir une évolution clinique défavorable et un pronostic plus sombre. Seuls les patients aux stades de la maladie FIGO 1A1 et 1B1 seront observés, ce qui n'a pas été fait dans les études précédentes. De cette façon, les patients qui seraient traités chirurgicalement seraient isolés, et chez qui un résultat clinique plus mauvais pourrait être prédit et un traitement supplémentaire pourrait être planifié individuellement.

But de la recherche

L'étude déterminera l'importance de l'expression immunohistochimique de la protéine IMP3 dans le carcinome épidermoïde cervical en tant que facteur pronostique associé à un grade histologique tumoral plus élevé, à un stade FIGO plus élevé, à une évolution plus médiocre et à l'issue de la maladie.

Hypothèse de recherche

L'expression immunohistochimique de la protéine IMP3 dans le carcinome épidermoïde du col de l'utérus était associée à une évolution clinique et à des résultats de la maladie plus faibles, à une durée d'intervalle sans maladie plus courte et à des résultats de survie à 5 ans plus faibles.

Détermination immunohistochimique de l'expression de la protéine IMP3 dans le cancer du col de l'utérus - comme nouveau facteur pronostique

Seront exclus de la recherche :

• les patients ayant subi une chimio et/ou une radiothérapie préopératoire
• patients atteints de tumeurs malignes gynécologiques ou autres associées
• les patients atteints d'autres types histologiques de tumeurs (adénocarcinome, adénosquameux, neuroendocrine, etc.) La recherche sera effectuée sur des préparations pathohistologiques de matériel chirurgical de patients opérés pour un cancer du col de l'utérus à SKB Mostar au cours de la période susmentionnée.

L'expression de la protéine IMP3 sera déterminée par une méthode immunohistochimique et une analyse statistique sera utilisée pour évaluer l'association de l'expression avec la progression clinique et pathologique de la maladie et les paramètres de survie.

Un aperçu de la documentation médicale (antécédents médicaux des patients et documentation médicale des patients en oncologie du Département d'oncologie et de gynécologie Clinique SKB Mostar) fournira des données cliniques sur l'âge des patients, le stade clinique de la maladie déterminé par les critères de classification FIGO, la récidive / durée de période sans signes de maladie et résultat clinique.

Méthodes de recherche:

Les échantillons de tumeurs à analyser seront obtenus par coupes de 4μ de blocs de paraffine archivés.

Des anticorps monoclonaux antihumains de souris an IMP3 (DAKO) à une dilution de 1:100 seront utilisés pour l'analyse immunohistochimique.

Le processus immunohistochimique commencera par un déparaffinage du tissu d'abord dans du xylène, puis par une réhydratation dans des alcools de concentrations toujours plus faibles. L'incubation dans 0,1 % de H2O2 (30 minutes à température ambiante) a inactivé la peroxydase endogène. Afin de détecter les sites antigéniques, les coupes seront bouillies dans un tampon citrate, pH 9, dans un four à micro-ondes à 95°C pendant 10 minutes, puis lavées dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Après refroidissement à température ambiante, les coupes ont été incubées avec des anticorps primaires pendant 60 minutes. Après une heure d'incubation avec l'anticorps primaire et lavage en PBS, une détection secondaire à la diaminobenzidine (DAB) sera utilisée. Une peroxydase EnVision Detection Systems indépendante des anticorps (DAB, Rabbit / Mouse K 5007) sera utilisée à cette fin. Après une incubation de 30 minutes et un lavage dans du PBS, les coupes seront colorées avec de la diaminobenzidine (DAB) pendant 10 minutes à température ambiante et lavées dans de l'eau distillée, et colorées avec de l'hémalun. Les incisions seront ensuite insérées dans le milieu de montage et recouvertes de lamelles. Les cellules qui ont réagi avec les anticorps primaires appropriés doivent avoir des cytoplasmes colorés.

Les résultats de la coloration immunohistochimique seront interprétés de manière semi-quantitative. Les échantillons présentant une coloration cytoplasmique dans plus de 10 % des cellules tumorales seront considérés comme une expression positive et seront classés en 5 catégories : 0 (1 % -10 % des cellules colorées), 1 (11 % -25 %), 2 ( 26% 50) %), 3 (51% -75%) et 4 (76% -100%). L'intensité de l'expression d'IMP3 sera classée comme négative, faible, modérée ou sévère.

Les sections destinées au contrôle négatif par coloration immunohistochimique de chaque antigène seront soumises, avec d'autres sections, à la même procédure, sauf qu'elles n'incuberont pas avec l'anticorps primaire, mais seront dans du PBS pendant ce temps. Les lames de contrôle du fabricant seront utilisées comme contrôle positif.

Les spécimens seront examinés avec un microscope optique Olympus BX40 (Olympus, Tokyo, Japon).

La survie totale des patientes (OS) a été définie comme la période de temps entre la date de la chirurgie et la date du dernier contrôle clinique ou du décès par cancer du col de l'utérus.

L'intervalle sans maladie (DFS) est défini comme l'intervalle de temps entre la date de la chirurgie et la date de récidive de la maladie.

Traitement statistique des données :

Les résultats de recherche obtenus seront stockés dans la base de données MS Excel 2007, pour toutes les analyses statistiques, le programme statistique SPSS 17 sera utilisé. Des méthodes de statistiques descriptives seront utilisées dans l'analyse des données. Les variables non paramétriques seront affichées sous forme de fréquence et de pourcentage. Selon la distribution des données, les variables paramétriques seront affichées sous forme de moyenne arithmétique et d'écart-type ou de médiane et d'intervalle interquartile. La distribution des données sera testée par le test de Kolmogorov-Smirnov. Un test du chi carré et un test exact de Fisher seront utilisés pour tester les différences entre les groupes pour les variables catégorielles si nécessaire. Le test t de Student et l'analyse de variance unidirectionnelle (ANOVA) ou le test U de Mann-Whitney et le test de Kruskal-Wallis comme alternatives non paramétriques au cas où la distribution des données s'écarte de la normale seront utilisés pour tester la différence entre les variables paramétriques. Des tests de corrélation et de régression appropriés seront utilisés pour tester la corrélation entre les variables examinées. Dans l'analyse de la survie et de la récidive de la maladie, la méthode de Kaplan-Meier et le test du log-rank de Cox-Mantel ou le test de Mantel-Haenszel seront utilisés selon les données obtenues. Le niveau de probabilité de p <0,005 sera considéré comme statistiquement significatif.