Valore prognostico dell'espressione della proteina IMP3 nel cancro cervicale

I biomarcatori molecolari potrebbero identificare selettivamente i pazienti con un decorso clinico più sfavorevole. Uno di questi biomarcatori è IMP3 - proteina legante l'mRNA del fattore di crescita insulino-simile II.

Il gruppo IGF è una complessa rete di regolazione a livello cellulare e sostanziale e svolge un ruolo fisiologico chiave nello sviluppo dell'organismo e nel mantenimento della normale funzione cellulare durante la vita fetale e postnatale. La sovraespressione dei fattori di crescita e dei loro recettori è un evento comune durante la carcinogenesi. Il sistema di segnalazione dell'IGF è sotto stretto controllo del normale stato fisiologico e una deviazione in questo delicato equilibrio può essere un fattore scatenante per molti eventi molecolari che portano allo sviluppo di tumori maligni. Un membro del sistema IGF è la proteina legante l'mRNA (IMP) del fattore di crescita insulino-simile II che è stato scoperto essere un attivatore dell'mRNA di traduzione dell'IGF-II acquisendo così un ruolo dominante nel controllo della proliferazione cellulare IGF-II-dipendente.

La famiglia di proteine ​​IMP contiene 3 proteine ​​(IMP1, IMP2, IMP3). IMP3 è normalmente espresso nei tessuti fetali durante l'embriogenesi. In età adulta, appare come un'oncoproteina espressa solo nei tessuti tumorali senza la presenza nel tessuto benigno circostante (adiacente). Precedenti studi in vitro hanno dimostrato che l'IMP3 stimola la proliferazione delle cellule tumorali attivando la traduzione dell'IGF II e l'adesione e l'invasione tramite molecole di adesione e metalloproteinasi della matrice 1.

I risultati di recenti ricerche sul cancro del collo dell'utero e le sue lesioni precancerose hanno collegato l'espressione della proteina IMP3 alla displasia cervicale e la possibilità che la displasia cervicale grave (CIN III) progredisca verso il carcinoma a cellule squamose. Una maggiore espressione della proteina IMP3 è stata trovata nei citoplasmi delle cellule di displasia cervicale grave (CIN III) e delle cellule tumorali invasive rispetto alle cellule di cambiamento CIN I e CIN II. La sensibilità dell'espressione di IMP3 nelle cellule tumorali era del 96%. Nelle preparazioni che erano IMP3 negative, nessun ulteriore monitoraggio e trattamento ha rivelato il carcinoma a cellule squamose. Ulteriori analisi hanno indicato la possibilità di determinare l'espressione di IMP3 sui primi campioni di biopsia cervicale in pazienti con lesioni HSIL come biomarcatore per rilevare un sottogruppo di pazienti in cui ci si può aspettare l'invasività della lesione.

Sulla base di studi precedenti, è stato sviluppato un anticorpo monoclonale specifico per IMP3, utilizzato con successo nei metodi immunoistochimici di routine che studiano l'espressione delle proteine ​​IMP3 in vari tumori maligni. Recentemente è stato scoperto che l'espressione della proteina IMP3 è associata a un decorso clinico più aggressivo ea un esito meno favorevole sia nelle malattie ginecologiche che in quelle maligne di altri apparati.

Problemi di ricerca

Nonostante le precedenti conoscenze di prevenzione, individuazione e trattamento, il cancro cervicale provoca ancora grande dolore e mortalità. Il decorso clinico è stato finora trascurato per quanto riguarda lo stadio clinico e patologico della malattia e, sulla base dei parametri istologici e dell'estensione anatomica della malattia, è stata presa una decisione sull'ulteriore trattamento e prognosi della malattia.

La ricerca precedente ha fornito solo un'introduzione all'associazione dell'espressione della proteina IMP3 con il cancro cervicale. È stata trovata un'associazione tra l'aumentata espressione della proteina IMP3 nei tumori ginecologici e altri nel corpo con un esito di malattia peggiore.

Questo studio esaminerà l'espressione della proteina IMP3 nel carcinoma a cellule squamose cervicali con l'obiettivo di rilevare e collegare l'aumentata espressione della proteina IMP3 in pazienti che dovrebbero avere un decorso clinico sfavorevole e una prognosi peggiore. Saranno osservati solo i pazienti negli stadi della malattia FIGO 1A1 e 1B1, cosa che non è stata fatta in studi precedenti. In questo modo, i pazienti che verrebbero trattati chirurgicamente verrebbero individuati e nei quali potrebbe essere previsto un esito clinico peggiore e potrebbe essere pianificato un trattamento aggiuntivo individualmente.

Scopo della ricerca

Lo studio determinerà l'importanza dell'espressione immunoistochimica della proteina IMP3 nel carcinoma a cellule squamose cervicali come fattore prognostico associato a grado istologico del tumore più elevato, stadio FIGO più elevato, decorso peggiore e esito della malattia.

Ipotesi di ricerca

L'espressione immunoistochimica della proteina IMP3 nel carcinoma a cellule squamose del collo dell'utero è stata associata a un decorso clinico e un esito della malattia più scarsi, una durata dell'intervallo libero da malattia più breve e risultati di sopravvivenza a 5 anni più scarsi.

Determinazione immunoistochimica dell'espressione della proteina IMP3 nel cancro cervicale - come nuovo fattore prognostico

Saranno esclusi dalla ricerca:

• pazienti sottoposti a chemio e/o radioterapia preoperatoria
• pazienti con patologie ginecologiche o di altra natura associate
• pazienti con altri tipi istologici di tumori (adenocarcinoma, adenosquamoso, neuroendocrino, ecc.) La ricerca sarà effettuata su preparazioni istopatologiche di materiale chirurgico di pazienti operate per cancro cervicale in SKB Mostar nel suddetto periodo.

L'espressione della proteina IMP3 sarà determinata mediante metodo immunoistochimico e l'analisi statistica sarà utilizzata per valutare l'associazione dell'espressione con la progressione clinica e patologica della malattia ei parametri di sopravvivenza.

Approfondimento della documentazione medica (anamnesi dei pazienti e documentazione medica dei pazienti oncologici del Dipartimento di Oncologia e Ginecologia Clinica SKB Mostar) fornirà dati clinici sull'età dei pazienti, stadio clinico della malattia determinato dai criteri di classificazione FIGO, recidiva / durata del periodo senza segni di malattia ed esito clinico.

Metodi di ricerca:

I campioni di tumore per l'analisi saranno ottenuti da sezioni da 4μ di blocchi di paraffina archiviati.

Per l'analisi immunoistochimica verranno utilizzati anticorpi monoclonali antiumani di topo an IMP3 (DAKO) alla diluizione 1: 100.

Il processo immunoistochimico inizierà decerando il tessuto prima in xilene e poi reidratandolo in alcoli a concentrazioni sempre più basse. L'incubazione in H2O2 allo 0,1% (30 minuti a temperatura ambiente) ha inattivato la perossidasi endogena. Per rilevare i siti antigenici, le sezioni saranno bollite in tampone citrato, pH 9, in un forno a microonde a 95°C per 10 minuti, quindi lavate in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS). Dopo il raffreddamento a temperatura ambiente, le sezioni sono state incubate con anticorpi primari per 60 minuti. Dopo un'ora di incubazione con l'anticorpo primario e lavaggio in PBS, verrà utilizzato il rilevamento secondario con diaminobenzidina (DAB). A tale scopo verrà utilizzato un EnVision Detection Systems Peroxidase (DAB, Rabbit / Mouse K 5007) indipendente dall'anticorpo. Dopo 30 minuti di incubazione e lavaggio in PBS, le sezioni saranno colorate con diaminobenzidina (DAB) per 10 minuti a temperatura ambiente e lavate in acqua distillata e colorate con hemalaun. Le incisioni verranno quindi adattate al mezzo di adattamento e coperte con vetrini coprioggetto. Le cellule che hanno reagito con gli anticorpi primari appropriati dovrebbero avere citoplasmi colorati.

I risultati della colorazione immunoistochimica saranno interpretati semiquantitativamente. I campioni con colorazione citoplasmatica in più del 10% delle cellule tumorali saranno considerati espressione positiva e saranno classificati in 5 categorie: 0 (1% -10% delle cellule colorate), 1 (11% -25%), 2 ( 26% 50) %), 3 (51% -75%) e 4 (76% -100%). L'intensità dell'espressione di IMP3 sarà classificata come negativa, debole, moderata o grave.

Le sezioni destinate al controllo negativo mediante colorazione immunoistochimica di ciascun antigene saranno sottoposte, insieme ad altre sezioni, alla stessa procedura, tranne per il fatto che non saranno incubate con l'anticorpo primario, ma saranno in PBS durante quel periodo. I vetrini di controllo del produttore verranno utilizzati come controllo positivo.

I campioni saranno esaminati con un microscopio ottico Olympus BX40 (Olympus, Tokyo, Giappone).

La sopravvivenza totale del paziente (OS) è stata definita come il periodo di tempo tra la data dell'intervento chirurgico e la data dell'ultimo controllo clinico o il decesso per cancro cervicale.

L'intervallo libero da malattia (DFS) è definito come l'intervallo di tempo tra la data dell'intervento chirurgico e la data della recidiva della malattia.

Elaborazione dati statistici:

I risultati della ricerca ottenuti saranno archiviati nel database MS Excel 2007, per tutte le analisi statistiche verrà utilizzato il programma statistico SPSS 17. Metodi statistici descrittivi saranno utilizzati nell'analisi dei dati. Le variabili non parametriche verranno visualizzate come frequenza e percentuale. A seconda della distribuzione dei dati, le variabili parametriche verranno visualizzate come media aritmetica e deviazione standard o come mediana e intervallo interquartile. La distribuzione dei dati sarà verificata mediante il test di Kolmogorov-Smirnov. Un test del chi-quadrato e il test esatto di Fisher saranno utilizzati per testare le differenze tra i gruppi per le variabili categoriche, ove necessario. Il test t di Student e l'analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) o il test U di Mann-Whitney e il test di Kruskal-Wallis come alternative non parametriche nel caso in cui la distribuzione dei dati devii dal normale verranno utilizzati per testare la differenza tra variabili parametriche. Verranno utilizzati opportuni test di correlazione e regressione per testare la correlazione tra le variabili esaminate. Nell'analisi della sopravvivenza e della recidiva della malattia, verranno utilizzati il ​​metodo di Kaplan-Meier e il test log-rank di Cox-Mantel o il test di Mantel-Haenszel a seconda dei dati ottenuti. Il livello di probabilità di p<0.005 sarà considerato statisticamente significativo.