Proteiinin IMP3-ilmentymisen ennustearvo kohdunkaulan syövässä

Molekyylibiomarkkerit voisivat valikoivasti tunnistaa potilaat, joilla on epäsuotuisampi kliininen kulku. Yksi näistä biomarkkereista on IMP3 - insuliinin kaltainen kasvutekijä II:n mRNA:ta sitova proteiini.

IGF-ryhmä on monimutkainen säätelyverkosto solutasolla ja merkittävällä tasolla, ja sillä on keskeinen fysiologinen rooli organismin kehityksessä ja normaalin solutoiminnan ylläpitämisessä sikiön ja synnytyksen jälkeisen elämän aikana. Kasvutekijöiden ja niiden reseptorien yli-ilmentyminen on yleinen tapahtuma karsinogeneesin aikana. IGF-signalointijärjestelmä on tiukasti normaalin fysiologisen tilan hallinnassa, ja tämän herkän tasapainon poikkeama voi laukaista monia molekyylitapahtumia, jotka johtavat pahanlaatuisten kasvainten kehittymiseen. Yksi IGF-järjestelmän jäsen on insuliinin kaltainen kasvutekijä II:n mRNA:ta sitova proteiini (IMP), jonka on havaittu olevan IGF-II-translaatio-mRNA:n aktivaattori, jolloin sillä on hallitseva rooli IGF-II-riippuvaisen soluproliferaation säätelyssä.

IMP-proteiiniperhe sisältää 3 proteiinia (IMP1, IMP2, IMP3). IMP3 ilmentyy normaalisti sikiön kudoksissa alkion synnyn aikana. Aikuisena se näkyy onkoproteiinina, joka ilmentyy vain kasvainkudoksissa ilman läsnäoloa ympäröivässä (viereisessä) hyvänlaatuisessa kudoksessa. Aiemmat in vitro -tutkimukset ovat osoittaneet, että IMP3 stimuloi kasvainsolujen lisääntymistä aktivoimalla IGF II:n translaatiota ja adheesiota ja invaasiota adheesiomolekyylien ja matriksin metalloproteinaasien 1 kautta.

Tuoreen kohdunkaulan syövän ja sen esisyövän vaurioiden tutkimuksen tulokset ovat yhdistäneet IMP3-proteiinin ilmentymisen kohdunkaulan dysplasiaan ja mahdollisuuteen, että vakava kohdunkaulan dysplasia (CIN III) etenee okasolusyöpään. Korkeampi IMP3-proteiinin ilmentyminen havaittiin vakavan kohdunkaulan dysplasia (CIN III) -solujen ja invasiivisten kasvainsolujen sytoplasmoissa verrattuna CIN I- ja CIN II -muutossoluihin. IMP3:n ilmentymisen herkkyys kasvainsoluissa oli 96 %. Valmisteissa, jotka olivat IMP3-negatiivisia, jatkoseuranta ja -hoito ei paljastanut levyepiteelisyöpää. Lisäanalyysit osoittivat mahdollisuuden määrittää IMP3:n ilmentyminen ensimmäisistä kohdunkaulan biopsianäytteistä potilailla, joilla oli HSIL-leesioita biomarkkerina, jotta voidaan havaita potilaiden alaryhmä, jossa leesion invasiivisuutta voidaan odottaa.

Aikaisempien tutkimusten perusteella on kehitetty IMP3:lle spesifinen monoklonaalinen vasta-aine, jota käytetään menestyksekkäästi rutiininomaisissa immunohistokemiallisissa menetelmissä, jotka tutkivat IMP3-proteiinien ilmentymistä erilaisissa pahanlaatuisissa kasvaimissa. Äskettäin on havaittu, että IMP3-proteiinin ilmentymiseen liittyy aggressiivisempi kliininen kulku ja vähemmän suotuisa lopputulos sekä gynekologisissa että pahanlaatuisissa muiden elinjärjestelmien sairauksissa.

Tutkimuskysymykset

Aiemmasta ennaltaehkäisystä, havaitsemisesta ja hoidosta tiedosta huolimatta kohdunkaulansyöpä aiheuttaa edelleen suurta kipua ja kuolleisuutta. Kliininen kulku on toistaiseksi jäänyt taudin kliinisen ja patologisen vaiheen osalta huomiotta ja taudin histologisten parametrien ja anatomisen laajuuden perusteella tehtiin päätös taudin jatkohoidosta ja ennusteesta.

Aiemmat tutkimukset ovat tarjonneet vain johdannon IMP3-proteiinin ilmentymisen ja kohdunkaulan syövän yhdistämiseen. IMP3-proteiinin lisääntyneen ilmentymisen välillä gynekologisissa ja muissa kehon syövissä havaittiin yhteys, jonka sairauden lopputulos oli huonompi.

Tässä tutkimuksessa tarkastellaan IMP3-proteiinin ilmentymistä kohdunkaulan levyepiteelikarsinoomassa tavoitteena havaita ja yhdistää IMP3-proteiinin lisääntynyt ilmentyminen potilailla, joiden kliinisen kulun odotetaan olevan epäsuotuisa ja ennusteen huonompi. Ainoastaan ​​FIGO 1A1 ja 1B1 taudin vaiheissa olevia potilaita tarkkaillaan, mitä ei ole tehty aiemmissa tutkimuksissa. Tällä tavalla erotettaisiin potilaat, joita hoidettaisiin kirurgisesti ja joille voitaisiin ennakoida huonompi kliininen lopputulos ja suunnitella lisähoitoa yksilöllisesti.

Tutkimuksen tarkoitus

Tutkimus selvittää IMP3-proteiinin immunohistokemiallisen ilmentymisen tärkeyden kohdunkaulan okasolusyövässä prognostisena tekijänä, joka liittyy korkeampaan kasvaimen histologiseen asteeseen, korkeampaan FIGO-vaiheeseen, huonompaan kulkuun ja sairauden lopputulokseen.

Tutkimushypoteesi

IMP3-proteiinin immunohistokemiallinen ilmentyminen kohdunkaulan levyepiteelikarsinoomassa liittyi huonompaan kliiniseen kuluun ja sairauden lopputulokseen, lyhyempään taudista vapaan ajanjakson kestoon ja huonompiin viiden vuoden eloonjäämistuloksiin.

IMP3-proteiinin ilmentymisen immunohistokemiallinen määritys kohdunkaulan syövässä - uutena prognostisena tekijänä

Seuraavat jätetään tutkimuksen ulkopuolelle:

• potilaat, joille on tehty ennen leikkausta kemo- ja/tai sädehoitoa
• potilaille, joilla on siihen liittyviä gynekologisia tai muita pahanlaatuisia kasvaimia
• potilaat, joilla on muita histologisia kasvaimia (adenokarsinooma, adenosquamous, neuroendokriininen jne.) Tutkimus tehdään SKB Mostarissa yllä olevan ajanjakson aikana kohdunkaulan syövän vuoksi leikattujen potilaiden leikkausmateriaalin patohistologisilla valmisteilla.

IMP3-proteiinin ilmentyminen määritetään immunohistokemiallisella menetelmällä ja tilastollista analyysiä käytetään arvioimaan ilmentymisen yhteyttä kliiniseen ja patologiseen sairauden etenemiseen ja eloonjäämisparametreihin.

Tieto lääketieteellisestä dokumentaatiosta (potilashistoriat ja syöpäpotilaiden lääketieteelliset dokumentaatiot SKB Mostarin syöpä- ja gynekologian klinikalta) tarjoaa kliinisiä tietoja potilaiden iästä, FIGO-luokituskriteereillä määritetystä taudin kliinisestä vaiheesta, uusiutumisesta / pituudesta. ilman taudin merkkejä ja kliinisiä tuloksia.

Tutkimusmenetelmät:

Kasvainnäytteet analysoitavaksi saadaan 4 μ:n arkistoitujen parafiinilohkojen osista.

Hiiren monoklonaalisia ihmisvastaisia ​​vasta-aineita IMP3:a (DAKO) laimennoksena 1:100 käytetään immunohistokemialliseen analyysiin.

Immunohistokemiallinen prosessi alkaa poistamalla kudoksesta vaha ensin ksyleenissä ja sitten rehydratoimalla alkoholeissa, joiden pitoisuus on yhä pienempi. Inkubointi 0,1 % H202:ssa (30 minuuttia huoneenlämpötilassa) inaktivoi endogeenisen peroksidaasin. Antigeenisten kohtien havaitsemiseksi leikkeet keitetään sitraattipuskurissa, pH 9, mikroaaltouunissa 95 °C:ssa 10 minuuttia, sitten pestään fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa (PBS). Huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen leikkeitä inkuboitiin primääristen vasta-aineiden kanssa 60 minuuttia. Kun on inkuboitu yksi tunti primaarisen vasta-aineen kanssa ja pesty PBS:ssä, käytetään sekundaarista detektiota diaminobentsidiinillä (DAB). Tähän tarkoitukseen käytetään vasta-aineista riippumatonta EnVision Detection Systems -peroksidaasia (DAB, Rabbit / Mouse K 5007). 30 minuutin inkubaation ja PBS:ssä pesun jälkeen leikkeet värjätään diaminobentsidiinillä (DAB) 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja pestään tislatulla vedellä ja värjätään hemalaunilla. Viillot sovitetaan sitten sovitusväliaineeseen ja peitetään peitelaseilla. Soluilla, jotka reagoivat sopivien primääristen vasta-aineiden kanssa, tulisi olla värjäytyneitä sytoplasmoja.

Immunohistokemiallisen värjäyksen tulokset tulkitaan semikvantitatiivisesti. Näytteitä, joissa on sytoplasminen värjäys yli 10 %:ssa kasvainsoluista, pidetään positiivisena ekspressiona, ja ne luokitellaan viiteen kategoriaan: 0 (1 % -10 % värjäytyneistä soluista), 1 (11 % -25 %), 2 ( 26 % 50 %), 3 (51 % -75 %) ja 4 (76 % -100 %). IMP3:n ilmentymisen intensiteetti luokitellaan negatiiviseksi, heikoksi, kohtalaiseksi tai vaikeaksi.

Leikkeet, jotka on tarkoitettu negatiiviseen kontrolliin kunkin antigeenin immunohistokemiallisella värjäyksellä, alistetaan muiden leikkeiden kanssa samalle menettelylle, paitsi että niitä ei inkuboida primaarisen vasta-aineen kanssa, vaan ne ovat PBS:ssä sinä aikana. Valmistajan kontrollilevyjä käytetään positiivisena kontrollina.

Näytteet tutkitaan Olympus BX40 -valomikroskoopilla (Olympus, Tokio, Japani).

Potilaan kokonaiseloonjääminen (OS) määriteltiin ajanjaksoksi leikkauksen päivämäärän ja viimeisen kliinisen kontrollin tai kohdunkaulan syövän aiheuttaman kuoleman päivämäärän välillä.

Taudista vapaa aikaväli (DFS) on aikaväli leikkauksen päivämäärän ja taudin uusiutumisen välillä.

Tilastotietojen käsittely:

Saadut tutkimustulokset tallennetaan MS Excel 2007 -tietokantaan, kaikissa tilastollisissa analyyseissä käytetään SPSS 17 -tilastoohjelmaa. Tietojen analysoinnissa käytetään kuvailevia tilastomenetelmiä. Ei-parametriset muuttujat näytetään frekvenssinä ja prosentteina. Tietojen jakautumisesta riippuen parametrimuuttujat näytetään aritmeettisena keskiarvona ja keskihajonnana tai mediaani- ja kvartiilivälinä. Aineiston jakautuminen testataan Kolmogorov-Smirnov-testillä. Khin-neliötestiä ja Fisherin tarkkaa testiä käytetään tarvittaessa kategoristen muuttujien ryhmien välisten erojen testaamiseen. Parametristen muuttujien välistä eroa testataan Studentin t-testillä ja yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA) tai Mann-Whitneyn U-testillä ja Kruskal-Wallis-testillä ei-parametrisina vaihtoehtoina, mikäli datajakauma poikkeaa normaalista. Tarkasteltavien muuttujien välistä korrelaatiota testataan asianmukaisilla korrelaatio- ja regressiotesteillä. Eloonjäämisen ja taudin uusiutumisen analysoinnissa käytetään saaduista tiedoista riippuen Kaplan-Meier-menetelmää ja Cox-Mantelin log-rank-testiä tai Mantel-Haenszel-testiä. Todennäköisyystasoa p <0,005 pidetään tilastollisesti merkitsevänä.