Valor pronóstico de la expresión de la proteína IMP3 en el cáncer de cuello uterino

Los biomarcadores moleculares podrían identificar selectivamente a los pacientes con un curso clínico más desfavorable. Uno de estos biomarcadores es IMP3 - proteína de unión al ARNm del factor II de crecimiento similar a la insulina.

El grupo IGF es una red reguladora compleja a nivel celular y sustancial y juega un papel fisiológico clave en el desarrollo del organismo y el mantenimiento de la función celular normal durante la vida fetal y posnatal. La sobreexpresión de factores de crecimiento y sus receptores es un evento común durante la carcinogénesis. El sistema de señalización de IGF está bajo un control estricto del estado fisiológico normal y una desviación en este delicado equilibrio puede desencadenar muchos eventos moleculares que conducen al desarrollo de malignidad. Un miembro del sistema IGF es la proteína de unión al ARNm (IMP) del factor de crecimiento II similar a la insulina, que se ha descubierto que es un activador del ARNm de traducción de IGF-II, por lo que adquiere un papel dominante en el control de la proliferación celular dependiente de IGF-II.

La familia de proteínas IMP contiene 3 proteínas (IMP1, IMP2, IMP3). IMP3 normalmente se expresa en tejidos fetales durante la embriogénesis. En la edad adulta, aparece como una oncoproteína que se expresa solo en los tejidos tumorales sin presencia en el tejido benigno circundante (adyacente). Estudios in vitro anteriores han demostrado que IMP3 estimula la proliferación de células tumorales al activar la traducción y la adhesión de IGF II y la invasión a través de moléculas de adhesión y metaloproteinasas de matriz 1.

Los resultados de investigaciones recientes sobre el cáncer de cuello uterino y sus lesiones precancerosas han relacionado la expresión de la proteína IMP3 con la displasia cervical y la posibilidad de que la displasia cervical grave (CIN III) progrese a carcinoma de células escamosas. Se encontró una mayor expresión de la proteína IMP3 en los citoplasmas de células de displasia cervical severa (CIN III) y células tumorales invasivas en comparación con las células de cambio CIN I y CIN II. La sensibilidad de expresión de IMP3 en células tumorales fue del 96%. En las preparaciones que fueron negativas para IMP3, ningún control ni tratamiento posterior reveló carcinoma de células escamosas. Análisis posteriores indicaron la posibilidad de determinar la expresión de IMP3 en las primeras muestras de biopsia de cuello uterino en pacientes con lesiones HSIL como biomarcador para detectar un subconjunto de pacientes en los que se puede esperar que la lesión sea invasiva.

Sobre la base de estudios previos, se ha desarrollado un anticuerpo monoclonal específico para IMP3 y se utiliza con éxito en métodos inmunohistoquímicos de rutina que estudian la expresión de proteínas IMP3 en diversas neoplasias malignas. Recientemente se ha encontrado que la expresión de la proteína IMP3 está asociada con un curso clínico más agresivo y un resultado menos favorable tanto en enfermedades ginecológicas como malignas de otros sistemas de órganos.

Problemas de investigación

A pesar de los conocimientos previos sobre prevención, detección y tratamiento, el cáncer de cuello uterino todavía causa un gran dolor y mortalidad. Hasta ahora se ha pasado por alto el curso clínico con respecto al estadio clínico y patológico de la enfermedad, y en base a los parámetros histológicos y la extensión anatómica de la enfermedad, se tomó una decisión sobre el tratamiento y el pronóstico posteriores de la enfermedad.

La investigación anterior solo ha proporcionado una introducción a la asociación de la expresión de la proteína IMP3 con el cáncer de cuello uterino. Se encontró una asociación entre el aumento de la expresión de la proteína IMP3 en cánceres ginecológicos y de otro tipo en el cuerpo con un peor resultado de la enfermedad.

Este estudio analizaría la expresión de la proteína IMP3 en el carcinoma de células escamosas de cuello uterino con el objetivo de detectar y relacionar el aumento de la expresión de la proteína IMP3 en pacientes que se espera que tengan un curso clínico desfavorable y un peor pronóstico. Solo se observarán pacientes en estadios de enfermedad FIGO 1A1 y 1B1, lo que no se ha hecho en estudios anteriores. De esta forma, se individualizarían los pacientes que serían tratados quirúrgicamente, en los que se podría predecir un peor resultado clínico y se podría planificar tratamiento adicional de forma individual.

Propósito de la investigación

El estudio determinará la importancia de la expresión inmunohistoquímica de la proteína IMP3 en el carcinoma de células escamosas de cuello uterino como factor pronóstico asociado con un grado histológico tumoral más alto, un estadio FIGO más alto, un curso y un resultado de la enfermedad más deficientes.

Hipótesis de investigación

La expresión inmunohistoquímica de la proteína IMP3 en el carcinoma de células escamosas de cuello uterino se asoció con un curso clínico y un resultado de la enfermedad más deficientes, una duración del intervalo libre de enfermedad más breve y resultados de supervivencia a los 5 años más deficientes.

Determinación inmunohistoquímica de la expresión de la proteína IMP3 en cáncer de cérvix - como nuevo factor pronóstico

Quedarán excluidos de la investigación:

• pacientes que han sido sometidos a quimioterapia y/o radioterapia preoperatoria
• pacientes con neoplasias malignas ginecológicas u otras asociadas
• pacientes con otros tipos histológicos de tumores (adenocarcinoma, adenoescamoso, neuroendocrino, etc.) La investigación se realizará en preparaciones patohistológicas de material quirúrgico de pacientes operadas por cáncer de cuello uterino en SKB Mostar en el período mencionado.

La expresión de la proteína IMP3 se determinará mediante un método inmunohistoquímico y se utilizará un análisis estadístico para evaluar la asociación de la expresión con la progresión clínica y patológica de la enfermedad y los parámetros de supervivencia.

La información sobre la documentación médica (historiales médicos de pacientes y documentación médica de pacientes oncológicos del Departamento de Oncología y Ginecología de la Clínica SKB Mostar) proporcionará datos clínicos sobre la edad de los pacientes, el estadio clínico de la enfermedad determinado por los criterios de clasificación de la FIGO, la recurrencia/duración de período sin signos de enfermedad y evolución clínica.

Métodos de búsqueda:

Las muestras de tumor para el análisis se obtendrán mediante secciones de 4 μ de bloques de parafina archivados.

Para el análisis inmunohistoquímico se utilizarán anticuerpos antihumanos monoclonales de ratón an IMP3 (DAKO) a una dilución de 1:100.

El proceso inmunohistoquímico comenzará desparafinando el tejido primero en xileno y luego rehidratándolo en alcoholes de concentraciones cada vez más bajas. La incubación en H2O2 al 0,1 % (30 minutos a temperatura ambiente) inactivó la peroxidasa endógena. Para detectar sitios antigénicos, las secciones se hervirán en tampón de citrato, pH 9, en un horno de microondas a 95 ° C durante 10 minutos, luego se lavarán en solución salina tamponada con fosfato (PBS). Después de enfriar a temperatura ambiente, las secciones se incubaron con anticuerpos primarios durante 60 minutos. Tras una hora de incubación con el anticuerpo primario y lavado en PBS, se utilizará la detección secundaria con diaminobencidina (DAB). Para este propósito, se utilizará una peroxidasa de EnVision Detection Systems independiente de anticuerpos (DAB, Rabbit / Mouse K 5007). Después de 30 minutos de incubación y lavado en PBS, las secciones se tiñerán con diaminobencidina (DAB) durante 10 minutos a temperatura ambiente y se lavarán con agua destilada y se tiñerán con hemalaun. Luego, las incisiones se colocarán en el medio adecuado y se cubrirán con cubreobjetos. Las células que reaccionaron con los anticuerpos primarios apropiados deberían tener citoplasmas teñidos.

Los resultados de la tinción inmunohistoquímica se interpretarán semicuantitativamente. Las muestras con tinción citoplasmática en más del 10% de las células tumorales se considerarán expresión positiva, y se clasificarán en 5 categorías: 0 (1% -10% de células teñidas), 1 (11% -25%), 2 ( 26% 50), 3 (51% -75%) y 4 (76% -100%). La intensidad de la expresión de IMP3 se clasificará como negativa, débil, moderada o grave.

Las secciones destinadas al control negativo por tinción inmunohistoquímica de cada antígeno se someterán, junto con otras secciones, al mismo procedimiento, excepto que no se incubarán con el anticuerpo primario, sino que estarán en PBS durante ese tiempo. Los portaobjetos de control del fabricante se utilizarán como control positivo.

Las muestras se examinarán con un microscopio óptico Olympus BX40 (Olympus, Tokio, Japón).

La supervivencia total del paciente (SG) se definió como el período de tiempo entre la fecha de la cirugía y la fecha del último control clínico o muerte por cáncer de cuello uterino.

El intervalo libre de enfermedad (DFS) se define como el intervalo de tiempo entre la fecha de la cirugía y la fecha de recurrencia de la enfermedad.

Procesamiento de datos estadísticos:

Los resultados de investigación obtenidos se almacenarán en la base de datos MS Excel 2007, para todos los análisis estadísticos se utilizará el programa estadístico SPSS 17. Se utilizarán métodos estadísticos descriptivos en el análisis de datos. Las variables no paramétricas se mostrarán como frecuencia y porcentaje. Dependiendo de la distribución de datos, las variables paramétricas se mostrarán como media aritmética y desviación estándar o como mediana y rango intercuartílico. La distribución de datos se probará mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Se usará una prueba de chi-cuadrado y la prueba exacta de Fisher para probar las diferencias entre los grupos para las variables categóricas cuando sea necesario. La prueba t de Student y el análisis de varianza unidireccional (ANOVA) o la prueba U de Mann-Whitney y la prueba de Kruskal-Wallis como alternativas no paramétricas en caso de que la distribución de datos se desvíe de la normalidad se utilizarán para probar la diferencia entre las variables paramétricas. Se utilizarán pruebas de correlación y regresión apropiadas para probar la correlación entre las variables examinadas. En el análisis de supervivencia y recurrencia de la enfermedad se utilizará el método de Kaplan-Meier y el log-rank test de Cox-Mantel o el test de Mantel-Haenszel en función de los datos obtenidos. Se tomará como estadísticamente significativo el nivel de probabilidad de p < 0,005.