子宮頸がんにおけるタンパク質 IMP3 発現の予後価値

分子バイオマーカーは、より好ましくない臨床経過を持つ患者を選択的に特定できる可能性がある。 これらのバイオマーカーの 1 つは、IMP3 (インスリン様成長因子 II mRNA 結合タンパク質) です。

IGF グループは、細胞レベルおよび実質レベルでの複雑な制御ネットワークであり、生物の発育と胎児および出生後の正常な細胞機能の維持において重要な生理学的役割を果たしています。 成長因子とその受容体の過剰発現は、発がん時によく見られる現象です。 IGF シグナル伝達システムは正常な生理学的状態の厳密な制御下にあり、この微妙なバランスの逸脱は悪性腫瘍の発症につながる多くの分子事象の引き金となる可能性があります。 IGF システムのメンバーの 1 つは、インスリン様成長因子 II mRNA 結合タンパク質 (IMP) です。これは、IGF-II 翻訳 mRNA の活性化因子であることがわかっており、IGF-II 依存性の細胞増殖の制御において主要な役割を果たしています。

IMP タンパク質ファミリーには 3 つのタンパク質 (IMP1、IMP2、IMP3) が含まれます。 IMP3 は通常、胚形成中に胎児組織で発現します。 成人期には、周囲（隣接する）良性組織には存在せず、腫瘍組織のみで発現される腫瘍タンパク質として現れます。 これまでの in vitro 研究では、IMP3 が IGF II の翻訳、接着、接着分子およびマトリックスメタロプロテイナーゼ 1 を介した浸潤を活性化することにより、腫瘍細胞の増殖を刺激することが示されています。

子宮頸がんとその前がん病変に関する最近の研究結果では、IMP3 タンパク質の発現と子宮頸部異形成、および重度子宮頸部異形成（CIN III）が扁平上皮がんに進行する可能性が関連付けられています。 CIN I および CIN II 変化細胞と比較して、重度子宮頸部異形成 (CIN III) 細胞および浸潤性腫瘍細胞の細胞質では、IMP3 タンパク質のより高い発現が見られました。 腫瘍細胞における IMP3 発現の感度は 96% でした。 IMP3 陰性の標本では、それ以上のモニタリングや治療は行われず、扁平上皮癌が明らかになりました。 さらなる分析により、HSIL病変を有する患者の最初の子宮頸部生検標本におけるIMP3発現を、病変浸潤が予想される患者のサブセットを検出するためのバイオマーカーとして測定できる可能性が示された。

以前の研究に基づいて、IMP3 に特異的なモノクローナル抗体が開発され、さまざまな悪性腫瘍における IMP3 タンパク質の発現を研究する日常的な免疫組織化学的方法で首尾よく使用されています。 最近、IMP3 タンパク質の発現は、婦人科疾患と他の器官系の悪性疾患の両方において、より悪性度の高い臨床経過とあまり好ましくない転帰に関連していることが判明した。

研究課題

予防、検出、治療に関するこれまでの知識にもかかわらず、子宮頸がんは依然として大きな痛みと死亡を引き起こします。 この疾患の臨床的および病理学的段階に関してはこれまで臨床経過が無視されており、疾患の組織学的パラメーターと解剖学的範囲に基づいて、疾患のさらなる治療と予後に関する決定が行われてきました。

これまでの研究では、IMP3 タンパク質発現と子宮頸がんとの関連性についての紹介しか提供されていませんでした。 婦人科癌および体内の他の癌における IMP3 タンパク質の発現増加と、疾患の転帰の悪化との間に関連性が見出されました。

この研究は、好ましくない臨床経過と予後不良が予想される患者における IMP3 タンパク質の発現増加を検出し、関連付ける目的で、子宮頸部扁平上皮癌における IMP3 タンパク質の発現を調べるものです。 図 1A1 および 1B1 の疾患段階にある患者のみが観察されますが、これは以前の研究では行われていませんでした。 このようにして、外科的治療を受ける患者が選り分けられ、より悪い臨床転帰が予測され、追加の治療を個別に計画できるようになります。

研究の目的

この研究では、子宮頸部扁平上皮癌におけるIMP3タンパク質の免疫組織化学的発現が、腫瘍の組織学的悪性度の高さ、FIGOの高段階、経過および疾患の転帰の不良に関連する予後因子として重要であることが判明する予定である。

研究仮説

子宮頸部扁平上皮癌における IMP3 タンパク質の免疫組織化学的発現は、臨床経過および疾患転帰の不良、無病期間の短縮、および 5 年生存転帰の不良と関連していた。

子宮頸がんにおける IMP3 タンパク質発現の免疫組織化学的測定 - 新しい予後因子として

以下のものは調査から除外されます。

• 術前化学療法および/または放射線療法を受けた患者
• 関連する婦人科疾患またはその他の悪性腫瘍を患っている患者
• 他の組織型の腫瘍（腺癌、腺扁平上皮癌、神経内分泌腫瘍など）を有する患者 研究は上記期間中にSKBモスタルで子宮頸がんの手術を受けた患者の手術材料の病理組織学的標本について実施される。

IMP3 タンパク質の発現は免疫組織化学的方法によって測定され、統計分析を使用して発現と臨床的および病理学的な疾患の進行および生存パラメータとの関連性が評価されます。

医療文書 (SKB モスタル腫瘍科・婦人科クリニックの患者の病歴と腫瘍患者の医療文書) に関する洞察により、患者の年齢、FIGO 分類基準によって決定される病気の臨床段階、再発/再発の長さに関する臨床データが提供されます。病気の兆候や臨床転帰のない期間。

研究手法：

分析用の腫瘍サンプルは、保存されたパラフィンブロックの 4μ 切片によって取得されます。

免疫組織化学分析には、1:100の希釈率のマウスモノクローナル抗ヒト抗体IMP3 (DAKO)を使用する。

免疫組織化学的プロセスは、最初にキシレン中で組織を脱蝋し、次により低い濃度のアルコール中で再水和することから始まります。 0.1% H2O2 中でのインキュベーション (室温で 30 分間) により、内因性ペルオキシダーゼが不活化されました。 抗原部位を検出するために、切片をpH 9のクエン酸緩衝液中で95℃の電子レンジで10分間煮沸し、その後リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄します。 室温まで冷却した後、切片を一次抗体とともに 60 分間インキュベートしました。 一次抗体と 1 時間インキュベートし、PBS で洗浄した後、ジアミノベンジジン (DAB) による二次検出を使用します。 この目的には、抗体非依存性 EnVision Detection Systems ペルオキシダーゼ (DAB、ウサギ / マウス K 5007) が使用されます。 30 分間のインキュベーションと PBS での洗浄後、切片をジアミノベンジジン (DAB) で室温で 10 分間染色し、蒸留水で洗浄し、ヘマランで染色します。 次いで、切開部をフィッティング媒体に嵌め込み、カバースリップで覆う。 適切な一次抗体と反応した細胞は細胞質を染色している​​はずです。

免疫組織化学的染色の結果は半定量的に解釈されます。 腫瘍細胞の 10% を超える細胞質染色があるサンプルは陽性発現とみなされ、5 つのカテゴリーに分類されます: 0 (染色細胞の 1% ～ 10%)、1 (11% ～ 25%)、2 ( 26% 50) %)、3 (51% -75%)、4 (76% -100%)。 IMP3 発現の強度は、陰性、弱い、中程度、または重度に分類されます。

各抗原の免疫組織化学的染色による陰性対照を目的とした切片は、他の切片とともに、一次抗体とインキュベートせず、その間は PBS 中に置くことを除いて、同じ手順に供されます。 メーカーによるコントロールスライドをポジティブコントロールとして使用します。

標本はオリンパス BX40 光学顕微鏡 (オリンパス、東京、日本) で検査されます。

患者の全生存期間（OS）は、手術日と子宮頸がんによる最後の臨床対照日または死亡日の間の期間として定義されました。

無病期間（DFS）は、手術日と病気の再発日の間の時間間隔として定義されます。

統計データ処理:

得られた研究結果は MS Excel 2007 データベースに保存され、すべての統計分析には SPSS 17 統計プログラムが使用されます。 データ分析には記述統計手法が使用されます。 ノンパラメトリック変数は頻度とパーセンテージとして表示されます。 データの分布に応じて、パラメトリック変数は算術平均と標準偏差、または中央値と四分位範囲として表示されます。 データ分布はコルモゴロフ-スミルノフ検定によってテストされます。 必要に応じて、カイ二乗検定とフィッシャーの直接確率検定を使用して、カテゴリ変数のグループ間の差異を検定します。 データ分布が正規から逸脱する場合のノンパラメトリック代替手段として、スチューデント t 検定および一元配置分散分析 (ANOVA) またはマン-ホイットニー U 検定およびクラスカル-ウォリス検定が、パラメトリック変数間の差異を検定するために使用されます。 適切な相関テストと回帰テストを使用して、調査された変数間の相関関係をテストします。 生存率と病気の再発の分析では、得られたデータに応じて、カプラン マイヤー法およびコックス マンテル ログランク テストまたはマンテル ヘンツェル テストが使用されます。 p <0.005 の確率レベルは、統計的に有意であるとみなされます。