Ekspressionsanalyse af urinvejseksosom miR-142-3p i type 2 diabetisk nefropati og evaluering af dets kliniske diagnostiske værdi

1. Foreløbig screening af miRNA'er: Gennem GEO-database og læsning af relateret litteratur blev miRNA'er differentielt udtrykt i type 2-diabetes og diabetisk nefropati udvalgt som potentielle kandidat-biomarkører til opfølgende verifikation.
2. Indsamling og behandling af kliniske prøver: Urin fra diabetespatienter blev indsamlet fra First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University i nøje overensstemmelse med dræningsstandarden, og de grundlæggende oplysninger om patienterne blev registreret. I mellemtiden blev de indsamlede prøver opdelt i type 2-diabetesgruppe og diabetisk nefropatigruppe alt efter om urinen var ledsaget af UACR≥30/g. Efterfølgende blev de indsamlede prøver centrifugeret og tilbageholdt til supernatant.
3. Isolering og identifikation af urineksosomer: Ultrahurtig centrifugeringsmetode blev brugt til at adskille de behandlede urinprøver af exosomer og derefter identificeret ved henholdsvis transmissionselektronmikroskopi, nanopartikelanalyse og Western blot.
4. Real-time PCR blev brugt til at detektere ændringerne i urin exosomal miRNA ekspressionsniveauer for de to grupper af patienter, og statistisk analyse og korrelationsanalyse af kliniske indikatorer for de differentielt udtrykte mirnas blev udført.

Målgenforudsigelse og berigelsesvejanalyse af differentielt udtrykte mirnas blev udført for at screene veje, der kunne være relateret til forekomsten og udviklingen af ​​DKD, og ​​derefter blev de relevante veje verificeret ved immunfluorescens, immunopræcipitat, Western blot, Real-time PCR og andre metoder.