Análisis de expresión del exosoma urinario miR-142-3p en la nefropatía diabética tipo 2 y evaluación de su valor diagnóstico clínico

1. Detección preliminar de miARN: a través de la base de datos GEO y la lectura de literatura relacionada, se seleccionaron los miARN expresados ​​diferencialmente en la diabetes tipo 2 y la nefropatía diabética como posibles biomarcadores candidatos para la verificación de seguimiento.
2. Recolección y tratamiento de muestras clínicas: Se recogió orina de pacientes diabéticos del Primer Hospital Afiliado de la Primera Universidad Médica de Shandong en estricta conformidad con el estándar de drenaje y se registró la información básica de los pacientes. Mientras tanto, las muestras recolectadas se dividieron en el grupo de diabetes tipo 2 y el grupo de nefropatía diabética según si la orina estaba acompañada de UACR≥30/g. Posteriormente, las muestras recolectadas se centrifugaron y se retuvieron como sobrenadante.
3. Aislamiento e identificación de exosomas urinarios: se utilizó el método de centrifugación ultrarrápida para separar los exosomas de las muestras de orina tratadas y luego se identificaron mediante microscopía electrónica de transmisión, análisis de nanopartículas y transferencia Western, respectivamente.
4. Se utilizó PCR en tiempo real para detectar los cambios en los niveles de expresión de miRNA exosomal urinario de los dos grupos de pacientes, y se realizaron análisis estadísticos y análisis de correlación de indicadores clínicos de los mirnas expresados ​​diferencialmente.

Se realizaron la predicción del gen diana y el análisis de la vía de enriquecimiento de mirnas expresadas diferencialmente para descartar las vías que podrían estar relacionadas con la aparición y el desarrollo de DKD, y luego las vías relevantes se verificaron mediante inmunofluorescencia, inmunocoprecipitado, Western blot, PCR en tiempo real y otros. métodos.