Expressieanalyse van urine-exosoom miR-142-3p bij type 2 diabetische nefropathie en evaluatie van de klinische diagnostische waarde ervan

1. Voorlopige screening van miRNA's: Via de GEO-database en het lezen van gerelateerde literatuur werden miRNA's die op verschillende manieren tot expressie komen in diabetes type 2 en diabetische nefropathie geselecteerd als potentiële kandidaat-biomarkers voor vervolgverificatie.
2. Verzameling en behandeling van klinische monsters: Urine van diabetespatiënten werd verzameld bij het First Affiliated Hospital van Shandong First Medical University in strikte overeenstemming met de drainagenorm, en de basisinformatie van patiënten werd geregistreerd. Ondertussen werden de verzamelde monsters verdeeld in type 2 diabetesgroep en diabetische nefropathiegroep, afhankelijk van de vraag of de urine gepaard ging met UACR≥30/g. Vervolgens werden de verzamelde monsters gecentrifugeerd en bewaard voor supernatant.
3. Isolatie en identificatie van urinaire exosomen: Ultrasnelle centrifugatiemethode werd gebruikt om de behandelde urinemonsters van exosomen te scheiden, en vervolgens geïdentificeerd door respectievelijk transmissie-elektronenmicroscopie, nanodeeltjesanalyse en Western blot.
4. Real-time PCR werd gebruikt om de veranderingen in exosomale miRNA-expressieniveaus in de urine van de twee groepen patiënten te detecteren, en statistische analyse en correlatieanalyse van klinische indicatoren van de differentieel tot expressie gebrachte mirna's werden uitgevoerd.

Doelgenvoorspelling en analyse van de verrijkingsroute van differentieel tot expressie gebrachte mirna's werden uitgevoerd om routes uit te sluiten die mogelijk verband houden met het optreden en de ontwikkeling van DKD, en vervolgens werden de relevante routes geverifieerd door immunofluorescentie, immunocoprecipitaat, Western blot, realtime PCR en andere. methoden.