Virtsan eksosomin miR-142-3p ilmentymisanalyysi tyypin 2 diabeettisessa nefropatiassa ja sen kliinisen diagnostisen arvon arviointi

1. MiRNA:iden alustava seulonta: GEO-tietokannan ja asiaan liittyvän kirjallisuuden lukemisen avulla miRNA:t, jotka ilmentyivät eri tavalla tyypin 2 diabeteksessa ja diabeettisessa nefropatiassa, valittiin mahdollisiksi ehdokasbiomarkkereiksi seurantaa varten.
2. Kliinisten näytteiden keräys ja hoito: Diabeettisten potilaiden virtsa kerättiin Shandongin First Medical Universityn First Affiliated Hospital -sairaalasta tiukasti tyhjennysstandardin mukaisesti ja potilaiden perustiedot rekisteröitiin. Sillä välin kerätyt näytteet jaettiin tyypin 2 diabetesryhmään ja diabeettisen nefropatian ryhmään sen mukaan, oliko virtsassa mukana UACR≥30/g. Tämän jälkeen kerätyt näytteet sentrifugoitiin ja säilytettiin supernatanttia varten.
3. Virtsan eksosomien eristäminen ja tunnistaminen: Ultranopeaa sentrifugointimenetelmää käytettiin eksosomien käsiteltyjen virtsanäytteiden erottamiseen ja tunnistettiin sitten transmissioelektronimikroskoopilla, nanopartikkelianalyysillä ja vastaavasti Western blot -menetelmällä.
4. Reaaliaikaista PCR:ää käytettiin havaitsemaan muutoksia virtsan eksosomaalisissa miRNA-ilmentymistasoissa kahdessa potilasryhmässä, ja tehtiin tilastollinen analyysi ja korrelaatioanalyysi erilaisesti ilmentyneiden mirnojen kliinisistä indikaattoreista.

Differentiaalisesti ekspressoituneiden mirnojen kohdegeenin ennuste- ja rikastumisreitin analyysi suoritettiin sellaisten reittien seulomiseksi, jotka saattoivat liittyä DKD:n esiintymiseen ja kehittymiseen, ja sitten asiaankuuluvat reitit varmennettiin immunofluoresenssilla, immunokosaostuksella, Western blotilla, reaaliaikaisella PCR:llä ja muilla. menetelmiä.