Ekspresjonsanalyse av urineksosome miR-142-3p i type 2 diabetisk nefropati og evaluering av dens kliniske diagnostiske verdi

1. Foreløpig screening av miRNA: Gjennom GEO-database og leserelatert litteratur ble miRNA differensielt uttrykt i type 2-diabetes og diabetisk nefropati valgt som potensielle kandidat-biomarkører for oppfølgingsverifisering.
2. Innsamling og behandling av kliniske prøver: Urin fra diabetespasienter ble samlet inn fra First Affiliated Hospital ved Shandong First Medical University i strengt samsvar med dreneringsstandarden, og grunnleggende informasjon om pasienter ble registrert. I mellomtiden ble de innsamlede prøvene delt inn i type 2-diabetesgruppe og diabetisk nefropatigruppe i henhold til om urinen ble ledsaget av UACR≥30/g. Deretter ble de innsamlede prøvene sentrifugert og beholdt for supernatant.
3. Isolering og identifikasjon av urineksosomer: Ultrarask sentrifugeringsmetode ble brukt for å separere de behandlede urinprøvene av eksosomer, og deretter identifisert ved henholdsvis transmisjonselektronmikroskopi, nanopartikkelanalyse og Western blot.
4. Sanntids-PCR ble brukt til å oppdage endringene i urineksosomale miRNA-ekspresjonsnivåer til de to gruppene av pasienter, og statistisk analyse og korrelasjonsanalyse av kliniske indikatorer for de differensielt uttrykte mirnaene ble utført.

Målgenprediksjon og anrikningsveianalyse av differensielt uttrykte mirnas ble utført for å sile ut veier som kan være relatert til forekomsten og utviklingen av DKD, og ​​deretter ble de relevante banene verifisert ved immunfluorescens, immunopresipitat, Western blot, sanntids PCR og annet metoder.