Análise de expressão do exossomo urinário miR-142-3p na nefropatia diabética tipo 2 e avaliação de seu valor diagnóstico clínico

1. Triagem preliminar de miRNAs: Através do banco de dados GEO e da leitura de literatura relacionada, miRNAs diferencialmente expressos em diabetes tipo 2 e nefropatia diabética foram selecionados como potenciais biomarcadores candidatos para verificação de acompanhamento.
2. Coleta e tratamento de amostras clínicas: A urina de pacientes diabéticos foi coletada no Primeiro Hospital Afiliado da Shandong First Medical University em estrita conformidade com o padrão de drenagem, e as informações básicas dos pacientes foram registradas. Enquanto isso, as amostras coletadas foram divididas em grupo de diabetes tipo 2 e grupo de nefropatia diabética de acordo com a presença de urina acompanhada de UACR≥30/g. Posteriormente, as amostras coletadas foram centrifugadas e retidas para sobrenadante.
3. Isolamento e identificação de exossomos urinários: O método de centrifugação ultrarrápida foi usado para separar as amostras de urina tratadas de exossomos e depois identificadas por microscopia eletrônica de transmissão, análise de nanopartículas e Western blot, respectivamente.
4. A PCR em tempo real foi utilizada para detectar as alterações nos níveis de expressão de miRNA exossômico urinário dos dois grupos de pacientes, e foram realizadas análises estatísticas e análises de correlação de indicadores clínicos dos mirnas diferencialmente expressos.

A predição do gene alvo e a análise da via de enriquecimento de mirnas diferencialmente expressos foram realizadas para rastrear vias que poderiam estar relacionadas à ocorrência e desenvolvimento de DKD, e então as vias relevantes foram verificadas por imunofluorescência, imunocoprecipitado, Western blot, PCR em tempo real e outros métodos.